载体自连问题？

一般如果你双酶切之后跑胶只有一条带就可以认为质粒被切开了~
有的酶的酶切位点比较相似时就是容易载体自连，尤其是在使用T4这种连接效率低识别率低的连接酶的时候，我们实验室用Hind III和EcoR I双酶切的时候就特 ...
最近也遇到了使用HindIII和EcorI酶切的位点就特别多的自连，而用NdeI和KpnI切的位点连接就很正常，看到你的说法也证实了我的假设，正在换酶切位点；

怀疑人生，不如怀疑假货！
双酶切自连率非常低，你检测下载体是否切干净咯。
如果无论怎么做都切不干净，坚决跟老师报告酶不行了，一定要坚决哦

载体自连一般都会发生，只是效率高低而已。如果两个酶切位点离得很近，就更容易发生切不干净的问题。我感觉最好的方法是从已经构建好的载体上切下来，然后再胶回收。这个对于我来说最好用。