伪绵马素是从仙鹤草中提取得到的一种化合物。仙鹤草含有多种化学成分，如仙鹤草素、鞣酸、挥发油、甾醇、有机酸、黄酮类和糖苷类等。目前，人们已经尝试了不同的技术手段对其化学成分进行分离和鉴定，尤其是酚类结构的化合物。然而，传统的柱色谱技术仍然是分离纯化酚类化合物的主要方法。
例如，在一篇名为《仙鹤草地上部分仙鹤草酚B的分离与鉴定》的文章中，研究人员使用硅胶和Sephadex LH-20柱色谱技术对仙鹤草石油醚提取物进行了分离纯化。另外，在另一篇名为《HPLC法测定仙鹤草中鹤草酚含量及鹤草酚结构的2DNMR分析研究》的文章中，研究人员通过溶剂提取、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20和重结晶等方法，成功分离得到了鹤草酚、仙鹤草酚B和伪绵马素这三个间苯三酚类化合物。
1、仙鹤草粗提物的制备：取150g仙鹤草粉碎成粗粉，加入1500ml的石油醚(60～90℃)，加热回流提取2次，每次1h；过滤，合并滤液，回收溶剂，残渣加50ml氯仿溶解，用50ml 5％氢氧化钠振摇萃取，弃去氯仿液，氢氧化钠液用稀盐酸调节pH值至1～2，用氯仿振摇萃取2次，合并氯仿液，加水洗涤，弃去水液，浓缩氯仿液，得到仙鹤草粗提物310mg。
2、第一次高速逆流色谱分离：将正己烷、乙腈、二氯甲烷、甲醇按体积比6:6:0.5:0.5组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分液得到上下两相溶液；以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相填满逆流色谱分离柱，柱温为20℃，开启速度控制器，调整转速为900rpm，以10mL/min的流速将流动相泵入柱内；待两相溶剂体系达到流动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口流出时)，设置流动相流速为5mL/min，取步骤1所得的仙鹤草粗提物310mg，用上下相溶液各5ml的混合液溶解后，由进样阀进样，根据高效液相色谱检测流出液(检测波长为285nm)，同时用自动部分收集器按5min梯度时间间隔分管收集75～100min时间段的洗脱液，即得间苯三酚类化合物的混合物。
3、第二次高速逆流色谱分离：将正己烷、二氯甲烷、乙腈按体积比10:7:3组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分液得到上下两相溶液；以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相填满逆流色谱分离柱，柱温为10℃，开启速度控制器，调整转速为900rpm，以10mL/min的流速将流动相泵入柱内；待两相溶剂体系达到流动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口流出时)，设置流动相流速为3mL/min，取步骤2所得的混合物47mg，用上下相溶液各5ml的混合液溶解后，由进样阀进样，检测波长为285nm，在目标峰出现约10分钟时将流动相的出液口与进液口连通以形成闭合回路，经过7次循环，直至目标化合物分离，即得化合物Ⅰ伪绵马素和化合物Ⅱα-Kosin。
4、目标化合物的结构鉴定与纯度检测：对步骤3分离得到的化合物Ⅰ和Ⅱ进行ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR分析，经结构解析并与文献数据比对，可确定得到的化合物Ⅰ为伪绵马素，化合物Ⅱ为α-Kosin，两者互为同分异构体。
[1] CN201410657473.9 一种分离纯化仙鹤草中间苯三酚类化合物的方法
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