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EDTA抗凝血直接PCR试剂盒的特点是什么? 1

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EDTA抗凝血直接PCR试剂盒采用独特的PCR缓冲液体系,无需DNA提取或样品处理即可直接进行全血样本的PCR扩增。不仅可以使用EDTA和Heparin抗凝全血作为模板,还可以使用含有血液的采集卡进行PCR扩增。这大大缩短了检测时间。试剂盒中的2×Super EasyTM Mix具有很强的抑制物耐受性,可以灵敏地扩增血液样本中的基因组和外源目的DNA片段。

2×Super EasyTM Mix(UNG)是在2×Super EasyTM Mix的基础上使用dUTP替代dTTP,并加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物,保证扩增的特异性和准确性,防止PCR产物污染问题。

Taq DNA polymerase是Foregene专门研制的DNA polymerase,对多种PCR反应抑制剂具有极强的耐受性,可以高效扩增痕量的DNA,扩增速度快,特别适合直接PCR反应。

EDTA抗凝血直接PCR试剂盒的应用是什么?

用于ITP与SLE患者外周血细胞microRNA差异表达的研究

通过比较ITP患者和SLE患者外周血细胞中微小RNAs(microRNAs,miRNAs)的差异表达,可以发现ITP患者存在特异性miRNA表达,从而可以在疾病早期区分ITP和SLE。

研究方法:从ITP患者和SLE患者各抽取外周静脉血样本,经过离心法分离外周血单个核细胞,提取总RNA。使用miRCURYTMHy3/Hy5试剂盒标记miRNA,并进行miRNA杂交。通过芯片扫描和分析,筛选出差异表达的miRNA,并进行RT-PCR验证。

研究结果:在ITP和SLE组的外周血白细胞中发现了121个差异表达的miRNAs,其中55个miRNAs仅在ITP组中表达,56个miRNAs仅在SLE组中表达,10个miRNAs在ITP和SLE组中表达相反。分层聚类分析显示ITP和SLE存在特异性miRNA表达谱。

参考文献

[1]Disordered epigenetic regulation in MLL-related leukemia[J].Yue Zhang,Aili Chen,Xiao-Mei Yan,Gang Huang.International Journal of Hematology.2012(4)

[2]Blockade of miR-150 Maturation by MLL-Fusion/MYC/LIN-28 Is Required for MLL-Associated Leukemia[J].Xi Jiang,Hao Huang,Zejuan Li,Yuanyuan Li,Xiao Wang,Sandeep Gurbuxani,Ping Chen,Chunjiang He,Dewen You,Shuodan Zhang,Jinhua Wang,Stephen Arnovitz,Abdel Elkahloun,Colles Price,Gia-Ming Hong,Haomin Ren,Rejani B.Kunjamma,Mary Beth Neilly,Jonathan M.Matthews,Mengyi Xu,Richard A.Larson,Michelle M.Le Beau,Robert K.Slany,Paul P.Liu,Jun Lu,Jiwang Zhang,Chuan He,Jianjun Chen.Cancer Cell.2012(4)

[3]Characterization of human platelet microRNA by quantitative PCR coupled with an annotation network for predicted target genes[J].Abdimajid Osman,Knut Fä,lker.Platelets.2011(6)

[4]The DLEU2/miR-15a/16-1 Cluster Controls B Cell Proliferation and Its Deletion Leads to Chronic Lymphocytic Leukemia[J].Ulf Klein,Marie Lia,Marta Crespo,Rachael Siegel,Qiong Shen,Tongwei Mo,Alberto Ambesi-Impiombato,Andrea Califano,Anna Migliazza,Govind Bhagat,Riccardo Dalla-Favera.Cancer Cell.2010(1)

[5]李哲.ITP与SLE患者外周血细胞microRNA差异表达的研究[D].吉林大学,2013.

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