酸性α乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)的应用及操作方法？ ¹

酸性α乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)是一种非特异性酯酶染色液，通过酸性条件下细胞中的酸性酯酶水解产生α-萘酚，并与六偶氮副品红偶联生成红色沉淀，从而定位于细胞质。该染色液在血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片的非特异性酯酶染色中广泛应用，并可用于氟化钠抑制实验。

酸性α乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)仅适用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

如何操作

1. 将血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片放入ANAE固定液中固定10-15分钟。

2. 用水洗涤5分钟。

3. 将样本放入配置好的ANAE孵育液中，放入湿盒中，室温避光孵育1小时，然后用水洗涤。

4. 将样本放入甲基绿染色液中复染5-15分钟，然后用水洗涤，进行镜检。

染色结果

细胞质：呈暗红色或棕色。

细胞核：呈绿色。

如何进行氟化钠抑制实验

按照ANAE抑制剂：ANAE孵育液=1：25的比例，在ANAE孵育液中加入ANAE抑制剂，然后按照上述染色方法进行。

注意事项

1. 血液或骨髓细胞涂片应新鲜，厚度适宜，一般在2天内进行染色，否则会影响酶的活性。

2. ANAE孵育液应即配即用，不宜久置，易失效或降低阳性程度。

3. ANAE孵育液配置后可能会出现浑浊，但不会影响染色效果。

4. 单核细胞呈中度至强阳性反应，对ANAE抑制剂敏感，而正常粒细胞呈阴性反应。

5. 每次染色时，应设置阳性对照。

主要参考资料

[1]酸性Α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)说明书