过表达载体测序？

构建过表达载体，pcDNA3.1（-）作为载体，过表片段长度是672bp，Amp作为抗生素，使用的感受态是DH5a，挑取单个菌落，37°C，220转摇菌12h，自己做了菌液PCR，可以跑出目的条带，但是有的有杂带有的没有杂带，总共选择七只送出去测序，但是最后反馈的结果都是样品浓度低，无信号，想知道是什么原因，或者可能是什么原因以进行排除，恳请各位指导