做realtime pcr,用的transgen 的SYBR Green 试剂,20ul的反应体系,其中包含
cDNA:0.8ul, Forward primer:0.4ul ,Reverse primer:0.4 ul ,
Mix: 10ul , ddH2O: 8.4 ul 使用两步法,94度30sec,{ 94度5sec,60度30sec} X45个循环,
退火温度尝试过56度、58度、60度,内参GapDH一直都是单峰,但是目的基因一直有双峰出现,