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如何准确检测6-巯基嘌呤? 1

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在临床治疗中,6-巯基嘌呤在用药剂量上如果浓度过低,会降低其抗免疫和抗炎作用,从而不能达到效果;如果浓度过高,会对骨髓、肝脏等器官造成副作用。因此,快速准确地检测6-巯基嘌呤的浓度在临床用药方面具有一定指导作用。


背景:6-巯基嘌呤(6-MP),为嘌呤类抗代谢药,对多种肿瘤有抑制作用。临床上主要用于急性白血病、绒毛腺皮癌、恶性葡萄胎等的治疗,具有重要的生物学意义。已报道测定6-巯基嘌呤的分析方法有分光光度法、荧光光度法、化学发光法、流动注射-化学发光法,示差分光光度法、磷光光谱、电化学分析 、溶出伏安法、催化动力学分析法、HPLC、RP-HPLC、MS、GC-MS等。


分析:

1. 磷钼酸铵分光光度法测定

温欣荣等人建立了磷钼酸铵分光光度法测定6-巯基嘌呤(6-MP)的方法。实验方法具体如下:


1)6-MP标准溶液

1.0 g/L,称取0.1000 g 6-MP,用3 mL 1 mol/L Na OH溶液溶解后,稀释至100 mL,于冰箱中4℃下保存;钼酸铵溶液:0.09224 g/m L,用四水合钼酸铵固体加热配制而成;NaH2PO4 溶液:20 g/L;H2SO4 溶液:3 mol/L;NaOH溶液:1 mol/L; Bi(NO3)3-H2SO4 溶液:称取2.5 g Bi(NO3)3·5H2O,加3 mol/L H2 SO4溶液100 mL溶解后,转移至 250 mL容量瓶中,定容。所用试剂均为分析纯;水为二次蒸馏水。


2)实验方法

25 mL容量瓶,依次加入0.09224 g/m L钼酸铵溶液1.50 mL、20 g/L NaH2PO4 溶液0.70 mL、 3 mol/L H2SO4 溶液1.20 mL、适量6-巯基嘌呤标准溶液、Bi(NO3)3 -H2SO4 溶液1.00 m L,加入 1 mol/L NaOH溶液2.50 mL调节体系酸度,于 85℃的水浴锅中反应5 min后,定容至刻度,静置 20 min后以试剂空白为参比,用1cm比色皿在波长710nm处测定吸光度A。


结果表明:在一定条件下,6-MP可以定量地与磷钼酸铵反应生成磷钼蓝,通过测定磷钼蓝的吸光度,从而间接地测定6-MP的含量。显色体系最大吸收波长为710nm, 6-MP质量浓度在0.004~0.06 mg/m L范围内与A呈良好的线性关系,线性回归方程为A=0.0258+10.655ρ(mg/m L),线性相关系数r=0.9986。方法用于实际药品中6-PM的含量测定,结果与药典法一致。


2. Cu(phen)22+-H2O2-6-巯基嘌呤化学发光体系测定

朱英贵等人基于 6 -巯基嘌呤 (6 -MP)对Cu(phen) 2+2 -H2O2体系化学发光具有较强的抑制作用,建立了化学发光测定 6 -MP的新方法。该方法线性范围为 2.0× 10 -7- 9.0× 10 -6 g/mL ,检出限为6.2× 10 -8g/mL ,对 1.0×10 -6 g/mL 6 -MP7次平行测定的相对标准偏差为 2.9% ,用于药物乐疾宁中 6 -MP的测定 ,回收率为 95 -103% 。


3. 钌(Ⅱ)-联吡啶-6巯基嘌呤-Ce(Ⅳ)化学发光体系测定

孟辉等人研究了酸性条件下,Ce(Ⅳ)-Ru(bipy)32+-6MP体系的化学发光反应情况,发现在4×10-7~4×10-5g/ml范围内,6MP的浓度与发光强度呈良好的线性关系,检出限为1.0×10-7g/ml,其RSD为2.3%(n=9,c=4×10-6g/ml),该法用于血清中6MP的直接测定,平均回收率为96.7~102%。


4. 催化动力学库仑滴定法测定

吴青等人首次报道用催化动力学和库仑分析相结合的方法测定抗癌药物乐疾宁中的主要成份6-巯基嘌呤。此法基于测定与催化剂(或称诱导剂)6-MP浓度成正比的库仑池反应诱导期(从接通电源到指示电流突然增大到指定值的毫库仑数),从而求出催化剂6-MP的量。该法具有库仑分析法与催化动力学分析法的优点即准确、灵敏、快迅和简便。方法线性范围为1.47×10-7~5.29×10-6mol/L。应用于药物乐疾宁中6-MP的测定,回收率为95%~103%,结果满意。


参考文献:

[1]秦苗,王红艳,王聪等. 表面增强拉曼光谱法对抗肿瘤药物6-巯基嘌呤的检测研究 [J]. 宿州学院学报, 2021, 36 (03): 36-40.

[2]温欣荣,涂常青,纪文钢. 磷钼酸铵分光光度法测定药物中6-巯基嘌呤 [J]. 分析试验室, 2013, 32 (04): 93-96. DOI:10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2013.0110.

[3]朱英贵,沐小龙,王伦等. Cu(phen)_2~(2+)-H_2O_2-6-巯基嘌呤化学发光体系测定6-巯基嘌呤 [J]. 安徽师范大学学报(自然科学版), 2003, (01): 43-44+47.

[4]孟辉,宋功武. 钌(Ⅱ)-联吡啶-6巯基嘌呤-Ce(Ⅳ)化学发光体系测定6-巯基嘌呤 [J]. 仪器仪表与分析监测, 1999, (03): 40-41+59.

[5]吴青,李汉杰,胡荫华. 催化动力学库仑滴定法测定6-巯基嘌呤 [J]. 分析测试通报, 1992, (05): 79-83.

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