乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)是一种含锌酶类,广泛分布于机体内,尤其在肝脏中含量最高。它在正常的生理代谢中起到催化乙醇(酒精)代谢的作用。在临床上,血液中ADH的含量可以作为诊断肝脏疾患的指标之一。当肝脏受损时,如急性中毒性肝损伤、酒精肝病、慢性活动肝炎等,ADH会从细胞内释放到血清中,导致血清中ADH的升高。
目前已经发现了人体内的7种ADH亚型,分别是ADH1A、ADH1B、ADH1C、ADH4、ADH5、ADH6和ADH7。
ADH1B的晶体结构如下图所示:
目前,人源的ADH主要通过原核表达方式进行生产。具体步骤包括从肝脏中提取mRNA,经过RT-PCR扩增目的基因,构建至表达载体,转化至表达感受态,然后在大肠杆菌中大量培养,诱导表达,最终通过纯化工艺获得纯品ADH。这种生产方式成本低,设备需求较少,其中最常用的培养基是M9,它的配制简单,原材料易于获取。
另外,人血清中ADH的检测常用的方法是双抗夹心酶联免疫分析(ELISA)。该方法具有高敏感性、强特异性、操作简便等优点。通过该方法可以建立标准曲线和方程,根据待测血清的OD值计算出相应的ADH含量。
在试剂盒的制备过程中,稀释液是影响试剂盒特异性和稳定性的重要因素之一。目前常用的稀释液中添加了BSA、酪蛋白、鸡标准血清、牛血清、马血清等成分,以提高试剂盒的抗干扰能力和稳定性。
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