本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法来检测AQP-4浓度。首先，在酶标板上包被抗人AQP-4单抗，然后将标准品和样品中的AQP-4与单抗结合。接下来，加入生物素化的抗人AQP-4，形成免疫复合物连接在板上。最后，加入辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色。通过测量450nm处的OD值，可以得出AQP-4浓度，因为AQP-4浓度与OD值成正比。可以通过绘制标准曲线来求出样本中AQP-4浓度。
试剂盒组成如下（2-8℃保存）：
酶标板（Coated Wells）
96孔
酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）
12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）
12ml
20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）
50ml
标准品（Standards）：50ng/瓶
2瓶
底物工作液（TMB Solution）
12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）
12ml
终止液（Stop Solution）
12ml
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应AQP-4含量。
[1] 鲁宏 孙善全；水通道蛋白-4在早期缺血性脑水肿中的表达。《解剖学杂志》2003年 第4期。
1
