免疫荧光标记的一抗的要求主要有:. 一抗最好是单抗,选取得抗体能够识别非变性位点,因此有些Western和免疫组化的抗体不一定适合于immunofluorescence。建议使用多聚甲醛的固定方法。
2. 二抗一般没有特殊的要求,但是最好使用荧光强度比较强的标记物,比如Oregon Green 488, Alexa Fluo, Cy3等。(molecular probe的二抗不错的)。
3. 考虑到双色荧光标的需要,二抗一般要求交叉吸附过的二抗,即抗兔二抗需要不和人、小鼠、羊等IgG反应。4. 考虑到双色荧光标的需要,两个一抗最好来源不同,这样可以免去分先后标记得麻烦。可以继续讨论哦。