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免疫荧光染色一抗和二抗的要求?

我想做某个酶的免疫荧光染色。想求教高手:一抗和二抗有什么要求。买那个公司的比较好?

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免疫荧光标记的一抗的要求主要有:. 一抗最好是单抗,选取得抗体能够识别非变性位点,因此有些Western和免疫组化的抗体不一定适合于immunofluorescence。建议使用多聚甲醛的固定方法。
2. 二抗一般没有特殊的要求,但是最好使用荧光强度比较强的标记物,比如Oregon Green 488, Alexa Fluo, Cy3等。(molecular probe的二抗不错的)。
3. 考虑到双色荧光标的需要,二抗一般要求交叉吸附过的二抗,即抗兔二抗需要不和人、小鼠、羊等IgG反应。4. 考虑到双色荧光标的需要,两个一抗最好来源不同,这样可以免去分先后标记得麻烦。可以继续讨论哦。
楼上的已经说的很清楚了,再补充几点,供参考。
1. 一抗抚育最好4℃过夜;2.二抗的抚育时间要掌握好,不易过短,也不能太长,我一般是在37℃1.5小时左右,效果挺好的;3.每次PBS清洗的时候,一定要洗彻底。
你可以找参考文献,要是没有可以试试ICC的,其实主要取决于检测的目的分子,如果空间折叠不是很复杂,可以试试WB和IHC抗体的。
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