为什么Tris缓冲液在生物化学研究中如此重要? ¹

当我们向溶液中加入酸、碱或水稀释时，会得到一种pH值基本保持不变的溶液，这就是缓冲液。缓冲液在生物化学研究中具有重要意义。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）是一种常用的有机物，化学式为C4H11NO3，呈白色结晶颗粒。Tris及其衍生物广泛应用于生物学实验中的缓冲液制备和药物制作，尤其在蛋白质和核酸相关实验中，Tris作为生物缓冲剂不可或缺。

Tris缓冲液的优点

1、Tris是一种弱碱，只需使用这一种缓冲体系就可以配制出酸性到碱性范围内的缓冲液。

2、Tris不与钙、镁离子和重金属离子发生沉淀，对实验结果的干扰很小。

Tris缓冲液的pH范围

在室温（25℃）下，Tris缓冲液的有效缓冲范围为pH7.0到9.2。

通常可以通过加入盐酸或氢氧化钠来调节所需的pH值，同时需要注意温度的影响。

以下是一些常用的Tris缓冲液及其pH范围：

Tris缓冲液：pH=7.5~9.0

Tris-HCl缓冲液：pH=7.5~8.5

Tris-磷酸盐缓冲液：pH=5.0~9.0

Tris缓冲液的种类

一、TBS缓冲液

TBS缓冲液是Tris-HCl缓冲盐溶液，是等渗盐溶液中加入Tris-HCl缓冲液得到的。

一般情况下，TBS缓冲液含有10mmol/L的Tris和0.9%的NaCl，通过加入1N HCl来调节pH至7.4。TBS缓冲液常用作贮存液，也可配制为TBST用于洗膜缓冲液。

需要注意的是，缓冲液的pH值易受溶液浓度和温度的影响，并且容易吸收空气中的CO2，因此配制好的缓冲液需要密封保存。此外，TBS缓冲液可能会干扰某些pH电极，因此需要使用与Tris溶液兼容的电极。

二、TBST缓冲液

TBST是TBS加Tween的缩写，含有Tris-HCl、NaCl和Tween20，是常用的洗膜缓冲液。

在Western Blot实验中，为了防止曝光图背景太高，可以使用含有Tween的TBST来洗掉PVDF膜上非特异性吸附的蛋白质。Tween是一种离子表面活性剂，具有复性抗原作用，可以提高抗体的特异性结合。TBST缓冲液在室温下储存，如果温度过低，可能会产生沉淀，可以通过溶解或加热后使用。

三、TE缓冲液

TE缓冲液是Tris-HCl缓冲液加EDTA，通常用作溶解剂或保持剂，主要用于调节pH值，常用于核酸电泳实验。

TE缓冲液是弱碱性的，对DNA的碱基具有保护作用，因此DNA在TE缓冲液中具有较好的稳定性，不容易破坏完整性或产生开环和断裂。TE缓冲液被广泛用于DNA的稳定和储存。

四、TAE缓冲液

TAE缓冲液是将TE缓冲液中的盐酸替换为乙酸（Tris/Acetate/EDTA）。

TAE是最常用的缓冲系统之一。其特点是在电泳过程中更符合实际相对分子质量的超螺旋结构，双链线状DNA在其中的迁移速度较快。当电泳大于13kb的片段时，使用TAE缓冲液可以获得更好的分离效果。此外，在回收DNA片段时，也可以使用TAE缓冲系统进行电泳。然而，TAE的缺点是缓冲容量较小，长时间电泳不可行，除非使用循环装置使两极的缓冲液交换。

五、TBE缓冲液

TBE缓冲液是将TE缓冲液中的盐酸替换为硼酸（Tris/Borate/EDTA）。

TBE缓冲液常用于丙烯酰胺实验和琼脂糖凝胶电泳。TBE缓冲液为无色澄清液体，可以在室温下储存，25℃时的pH值为8.2~8.4。在使用TBE缓冲液时，需要注意不能含有DNA水解酶和RNA水解酶。TBE缓冲液适用于长时间电泳，但是在TBE缓冲液中电泳时测得的超螺旋结构的相对分子质量会稍大于实际分子质量。