丝状真菌基因敲除一直不成功？

1.做丝状真菌的基因敲除一直没挑到转化子，随机插入概率很高。同源臂、目的基因敲除的位置、培养温度等条件都改过，但就是敲不掉。
2.后来换成做过量表达也是一样，大部分是随机插入，始终没有正确的转化子。
想问一下有没有相关经历的小伙伴们，这种问题怎么解决？跪求指导

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共7个回答

哪种微生物？用的是农杆菌介导吗？

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可以用原生质体，电击转化

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直接原生质体转，效率高

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2: 你要的是过表达，只要表达量增加不就行了吗？还有，除了随机插入，还有别的情况吗？？？

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2: 你要的是过表达，只要表达量增加不就行了吗？还有，除了随机插入，还有别的情况吗？？？
做过表达现在的情况是过表达盒插入到基因组里了，但是没把原来的目的基因替换掉啊，跳了300多个转化子，现在验证了200个，全是随机插入，感觉没有希望了

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哪种微生物？用的是农杆菌介导吗？
是的，农杆菌介导的红曲菌基因敲除，转化了很多次随机插入率很高，换了同源臂的长度，敲除的目的基因的长度，都换了，还是得不到。现在做过表达，还是随机插入，找不到原因，求大神指导

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可以用原生质体，电击转化
嗯，我是农杆菌介导的，这个原生质体电转化法效率高吗？我从来没做过

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