做淋巴细胞的实验。从外周血中用淋巴细胞分离液提取PBMCs,分层明显,然后将PBMC用IL-2、1640养着。后查阅文献说可以用饲养细胞加入让其更长时间生存。但是加入饲养细胞后文献上说共培育3-4天后需要把dead feeder cells and debris去除,说是用淋巴细胞分离液可以除去死细胞。可是我做了好几次了,管底根本看不到任何东西,也就是没有死细胞。反而是分离的白膜层很少,重悬后计数反而比原来少了。所以非常困惑。请教一下:
我用的淋巴细胞分离液是CEDARLANE公司的Lympholyte-H,分离PBMC按照说明书上是800g。那我用它来去除死细胞时,是否也是按照分离PBMC的方法和转速啊?为什么分不出来呢?
曾经采用低速离心法分离死细胞,500g,5-10min,可是还是无法分离出死细胞和碎片。