抗体的应用领域及缓冲液的制备方法？ ¹

抗体是一类糖蛋白，由B淋巴细胞分化的浆细胞产生，可以作为抗原受体结合于B细胞表面，也可以以分泌的形式存在于血液或体液中，参与清除抗原的过程。近年来，抗体在药物、诊断试剂、免疫亲和层析配基、药物载体工具等领域得到了广泛的应用。

如何制备缓冲液

平衡缓冲液的配制方法是将20 mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS）与不同浓度的NaCl混合，使其pH值为7.4。洗脱缓冲液的配制方法是将0.1 mol/L甘氨酸缓冲液调至pH 2.8。中和缓冲液的配制方法是将1 mol/L Tris-HCl缓冲液调至pH 9.0。

对于纯化载量较少的抗体，可以适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和pH值，以增强抗体和介质的吸附力。然而，高pH值可能会增加杂蛋白的吸附，因此在使用时需要根据实际情况进行调节。

以上缓冲液在使用前需要经过0.45μm滤膜过滤。

抗体的应用

(a) 装柱：将装有重组蛋白A的Sepharose4FF填料的柱子用洗脱缓冲液洗掉乙醇和杂质，然后用平衡缓冲液平衡柱子。

(b) 上样：将含有免疫抗体IgG的兔血清样品均匀地上柱，可以反复上样以更好地结合IgG（样品需要用平衡缓冲液稀释）。

(c) 洗涤：用平衡缓冲液洗涤柱子，直至基线趋于平缓。

(d) 洗脱：先以快速速度加入洗脱缓冲液，使pH降至约3.0，然后将IgG从填料上洗脱下来，立即用中和缓冲液中和洗脱液至中性pH，以防止洗脱缓冲液的酸性环境引起抗体失活。

参考文献

[1] 纳米抗体用于亲和纯化传统抗体的研究

[2] 蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用.唐秀