你知道IgG纯化树脂的特点和使用方法吗? ¹

简介^[1]

 IgG纯化树脂是一种高效的纯化和抗体结合蛋白的工具。它采用经过活化的琼脂糖凝胶作为基质，通过共价连接人的IgG来实现纯化和结合。这种纯化树脂适用于纯化多种蛋白，包括Protein A、Protein G和含有人工合成的Z抗体结合区的融合蛋白。该纯化树脂以悬浮液形式提供，纯度达到50%。

特点^[1]

 1. 该纯化树脂的配体为人IgG，每毫升纯化树脂的载量为6-10毫克人IgG。

 2. 该纯化树脂的结合量大于2毫克Protein A每毫升纯化树脂。

 3. 该纯化树脂的pH范围为3-10，保存温度为2-8摄氏度，含有20%的乙醇。

 4. 该纯化树脂具有刚性强、流速快（300 cm/h、100 kpa）的特点。

5. 该纯化树脂的基团脱落少，结合特异性强，载量高，寿命长。

运输和保存条件^[1]

该纯化树脂在常温下进行运输，保存时需要存放在4摄氏度，保质期为两年，不可冻存。

实验前准备^[1]

推荐使用以下缓冲液:

结合液：Tris-saline Tween 20 (TST): 50 mM Tris缓冲液、 pH 7.6、150 mM NaCl和0.05% Tween 20。

洗脱液：0.5 M CHCOOH (HAc) 用 CHCOONH4 调节 pH 到 3.4，或 0.1 M Glycine-HCl pH 3.0。

洗涤液：5 mM NH4Ac， pH 5.0

 操作步骤

1. 使用至少5倍柱床体积的TST清洗IgG纯化树脂，以去除残留的乙醇。

2. 使用至少2倍柱床体积的以下溶液依次平衡IgG纯化树脂：1) 0.5 M HAc， pH 3.4；2) TST； 3) 0.5 M HAc，pH 3.4；最后再用2倍柱床体积的TST平衡IgG纯化树脂两次。

3. 将待纯化的含有目的蛋白的样品调整到中性pH后，加入含有IgG纯化树脂的纯化柱中。

4. 静置5分钟后，使用5倍柱床体积的TST清洗IgG纯化树脂两次，再使用2倍柱床体积的5 mM NH4Ac pH 5.0清洗两次。

5. 使用0.5 M HAc pH 3.4或者0.1 M Glycine-HCl pH 3.0洗脱收集目的蛋白，并使用1 M的Tris-HCl（pH 9.0左右）调节pH到中性。

6. 使用BCA法（C503021）或（C503061）定量测定蛋白浓度，并使用SDS-PAGE确定蛋白的大致纯度。

参考文献

[1]IgG抗体纯化树脂产品介绍