1、楼主首先要确认挑选的克隆是正确的克隆，菌液pcr验证正确，应该提取质粒，并进行双酶切验证是否真的为阳性克隆。
2、菌液和质粒均没有信号，是不是载体拷贝数较低，楼主提取质粒后有没有进行电泳检测，确认载体浓度高低。
3、测序没有信号，和测序为空载还是两个不同的问题，一方面与载体浓度有关，另一方面楼主要确认选择的测序引物是否合适。
4、有可能测序供公司问题。
解决办法：
1、因为不清楚楼主使用的框架载体是什么载体，是否有通用引物？
其实楼主可以在构建好T克隆后就进行测序（T载体本身就经常被用来做亚克隆测序），T载体有自己的通用引物，发生没信号的概率比较低。因为你后续是进行酶切亚克隆的，不存在PCR的过程（PCR过程可能导致错配或突变等情况，所以一般要测序验证），发生目标基因突变的可能性较低，即T载体克隆阶段测序结果可以作为你亚克隆后的测序结果（结合双酶切验证结果）。
2、楼主也可以提取重组质粒，并进行双酶切验证，酶切确定为正确的质粒，且质粒浓度OK，可将该质粒作为样品送测序。
同时如果确认之前选择的引物没有问题，那么本次可以尝试寄送 自己的引物作为测序引物，比如你菌落PCR用的引物就可以作为测序用。
3、如果上述方法没办法解决，可以用你的引物对挑选的克隆进行pcr，然后胶回收你的目的条带，将这个回收PCR产物和你自己的引物一同送去测序。
方法还是比困难多，祝好1
