如何对双标腺病毒在过表达细胞系中进行检测?

双荧光指示体系：mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒。作用原理：mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。 我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体。红色的斑点指示自噬溶酶体，通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱。