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人参含量测定液相检测发现没用峰,为什么?

做人参皂苷Rg1,标准品浓度0.33mg/ml,甲醇定容,波长203nm,流动相乙腈-水(20:80),除了一个甲醇峰,40分钟内没有其他峰;改成流动相乙腈-水(80:20),16分钟没有峰;改成流动相乙腈-0.05%磷酸(20:80),40分钟没有峰,为什么会出现这种情况?


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这几天我也被一复方制剂的西洋参含量方法困扰,不过有些心得。1.流动相采用2005药典的人参的梯度系统可以,比西洋参等用磷酸的好,乙睛 水完全可以分离 人参皂苷 Rg1 Rb1 Re。2.采用磷酸和乙睛的系统我除伤柱子外,我不认为也没有什么好处。基线也容易漂。我的成药这个系统更漂。3.不同的色谱柱影响很大 我试了迪马的15 25 的柱子都没有好的效果,可能是柱子柱效不好了。我的柱子虽然不是新柱但也没有用多长时间。我打算用新的试试看(新柱购买中)我现在的柱子是安捷伦的,出峰比迪马的短很多,分离也好,峰比较窄。与柱填料的关系是很大的。4.梯度洗脱的比例可以调整,不过我的试验是调整1%,出峰时间就改变很大,有5-6min。改动是为了适应不同机器和色谱柱。5.柱温度的影响并不是很大,但还是有的,我用迪马用柱温就比不用好。而安捷伦柱子没有开柱问却比开柱问要好。6,用氯仿或乙醚提取是除去脂溶的杂质。正丁醇饱和的水溶液和氨试液都是除掉水或碱水溶的杂质。
建议你采用梯度洗脱,不要加磷酸,很伤柱子的,故障比较多,我做了2年都是用乙腈水,效果很好,Rg1、Re和Rb1分离均很好。同时要注意ODS柱的选择,不同型号的差别很大。
正丁醇饱和的水提取是完全可以提取出来人参皂苷的,最好采用热回流提取。我分析你提取不出来的原因:1.你的提取工艺水提取,人参皂苷不会很高吧。我作的要么是生药入药要么是75%的醇提取。2.你检验时候取样量是不是很少,成药里面人参的比例多少。我作的成药取相当于生药人参0.5g(75%醇提工艺)这三个皂苷的峰面积也不大。Rg1最大 其次是Rb1 Re。3.改成热回流提取吧。用水饱和正丁醇溶液浸泡后提取1.5小时。蒸干,甲醇溶解。
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