如何进行凝胶纯化以分离和纯化DNA片段? ¹

凝胶纯化是一种常用的分子克隆技术，可以根据DNA片段的大小进行分离和纯化。该过程从标准琼脂糖凝胶电泳开始，根据碱基对的长度分离DNA。在电泳后，可以从琼脂糖凝胶中切下DNA条带，然后进行纯化。

实验步骤

1. 根据琼脂糖凝胶电泳的Protocol做如下修改：

注：为了得到更好的分辨率，可以使用尽可能低浓度的琼脂糖凝胶（在可分辨的范围内保持在0.7%-0.8%的范围内）。

注：为了提高条带的分辨率，可以使用更宽的凝胶梳和在较低电压下运行凝胶。

注：为了减少DNA污染和减少DNA损伤的风险，可以在样品-样品之间预留空泳道，并尽量减少DNA在紫外线下的暴露时间。

2. 一旦凝胶电泳结束，需要将凝胶移动到一个紫外线箱中。为了保护紫外线箱，可以将凝胶放在玻璃板上，而不是塑料托盘。

注：试着将条带周围多余的凝胶去除，这对于后续的DNA纯化过程非常重要。

3. 将凝胶放入标记的EP管中。

4. 用秤称量凝胶的重量，可以用凝胶管的重量减去空管的重量来确定凝胶的液体体积。

5. 最后，可以使用商用的凝胶纯化试剂盒来分离和纯化DNA。在使用纯化的DNA进行下一步实验之前，确定分离出的DNA的浓度通常是很重要的。

提示和常见问题

如何提高条带的分辨率？

提高DNA条带分辨率的几种简单方法包括：在较低电压下运行较长时间的电泳、使用更宽的凝胶梳、在上样孔中加入较少的DNA。

如何更好地分离条带？

如果需要分离大小相近的条带，可以通过调整凝胶百分比来实现。较高比例的琼脂糖凝胶有助于分离较小的条带，而较低百分比的凝胶有助于分离较大的条带。

10%规则：

对于样品，要比所需的体积多10%，因为在上样过程中可能会丢失几个微升。