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如何从植物组织中提取高纯度的总RNA? 1

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本文介绍了一种从植物组织中提取高纯度总RNA的方法。该方法适用于富含多酚或淀粉的植物组织,如马铃薯块茎、白松松针或嫩苗以及西红柿叶等。每100 ml试剂可以处理100 mg组织200次。为了提取RNA,需要准备液氮、研钵、无RNase离心管、5 M NaCl(无RNase水配制)、氯仿、异丙醇、75%乙醇(无RNase水配制)和无RNase水。

提取操作步骤

1. 取不多于0.1g植物组织,在液氮中研碎,转移到1.5 ml离心管中,加入0.5 ml提取试剂,轻轻振荡混匀。

注:振荡时要避免过于剧烈,以免导致基因组DNA污染。

2. 将离心管放置在室温下静置5分钟。

3. 在4℃条件下以12000 rpm离心2-3分钟,将上清转移到新的无RNase离心管中。

4. 在上清中加入0.1 ml 5 M NaCl(无RNase水配制),轻轻混匀。

5. 加入0.3 ml氯仿,上下颠倒混匀。

6. 在4℃条件下以12000 rpm离心10-15分钟,将上层水相转移到新的无RNase离心管中。

7. 加入与所得水相等体积的异丙醇,混匀,室温放置10分钟。

8. 在4℃条件下以12000 rpm离心10-15分钟。弃掉上清液,注意不要倒出沉淀。加入1 ml 75%乙醇冲洗沉淀。(沉淀可能很难看见,操作时要小心。)

9. 在4℃条件下以5000-7000 rpm离心3分钟。倒出液体,注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体短暂离心,用枪头吸出,室温晾干1-2分钟至沉淀干燥。

10. 加入适量的无RNase水充分溶解RNA,然后在-70℃保存。

注意:本试剂具有刺激性味道,请在通风处进行操作。

主要参考资料

[1] 植物RNA提取试剂产品说明书

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