如何操作大鼠正常肝细胞? ¹

大鼠正常肝细胞是一种来源于肝脏组织的上皮细胞样贴壁生长细胞。它们可以在DMEM(PM150210) + 10% FBS(164210-500) + 1% P/S(PB180120)的培养基中进行培养。推荐的传代比例为1:2-1:4，每周建议换液2~3次。

细胞操作步骤

在收到大鼠正常肝细胞后，首先用75%酒精喷洒整个管子进行消毒，然后将细胞转移到T25培养瓶或6cm培养皿中（无需离心）。加入约5ml含有FBS的培养基，然后将其放入培养箱中过夜培养。在培养过程中，可以观察细胞的汇合度。如果汇合度未超过80%，则继续换液并继续培养。根据需要，可以进行传代或冻存。如果汇合度超过80%，则可以直接进行传代。

具体的传代步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤1-2次。

2. 在培养瓶中加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），将培养瓶倒置放入37℃的培养箱中预热1-3分钟。然后将培养瓶翻转，让胰酶与细胞接触10-30秒。在倒置显微镜下观察细胞的消化情况。如果大部分细胞变圆，迅速将培养瓶拿回操作台，轻轻敲击几下，然后加入少量完全培养基以停止消化。

3. 补充6-8ml完全培养基，轻轻混合后吸出一半，分装到新的培养瓶中。一般情况下，第一次传代的比例是一传三。

主要参考文献

[1] 姚娟娟，周晓蓉，牛廷勇；单壁碳纳米管对大鼠肝细胞株大鼠正常肝细胞的毒性作用。《毒理学杂志》。