小鼠卵巢癌细胞的来源和培养方法是什么? ¹

小鼠卵巢癌细胞是从小鼠卵巢癌组织中提取的，属于上皮细胞样的贴壁生长细胞，经过阴性检测，未发现支原体、细菌、酵母和真菌的存在。

细胞培养方法

1) 培养基及培养冻存条件准备

1. 准备90% DMEM培养基（DMEM, GIBCO, 货号11965-092）和10% 北美胎牛血清。

2. 培养条件为空气95%、二氧化碳5%、温度37°C，培养箱湿度为70%-80%。

3. 冻存液为90%血清和10% DMSO，使用时现配现用，并储存在液氮中。

2) 细胞处理

复苏细胞：

将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于冻存管盖部），摇晃解冻后，移入含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：

当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。对于贴壁细胞，传代步骤如下：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 在培养瓶中加入2ml消化液（0.25% trypsin-0.53mM EDTA），置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml培养基终止消化。

3. 轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。移入事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

细胞冻存：

当细胞生长状态良好时，可以进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先进行细胞消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。加入DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。

主要参考文献

[1] 俞晓毓  吴迪  王净  李菲  白绪乐  赵枫姝  窦骏  ；卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定。《中国组织工程研究》 2018年29期。