胰酶细胞消化液的应用及注意事项？ ¹

背景^[1-3]

胰酶细胞消化液是一种含有酚红的溶液，成分包括0.25%胰酶、0.02%EDTA和酚红，pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可直接用于细胞和组织的消化。

贴壁细胞的消化：

1、用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞，去除残余的血清。

2、加入适量的胰酶细胞消化液，略盖过细胞，放置一段时间。消化时间因细胞类型而异。

3、观察细胞收缩和形态变化，或用枪吹打细胞，若细胞可被吹打下来，则吸除消化液，加入含血清的培养液。

4、若消化不足，可重新加入胰酶细胞消化液。

5、若消化时间过长，细胞已脱落，可用胰酶细胞培养液将细胞吹打下来，离心沉淀后加入含血清的培养液。

组织的消化时间因组织类型而异，通常以充分打散组织为宜。

注意事项：

1、使用胰酶细胞消化液时要避免细菌污染。

2、胰酶细胞消化液的消化时间不宜过长，否则细胞生长状况会受到影响。

应用^[4][5]

胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS细胞消化效果的比较研究

本研究比较了胰酶和EDTA两种消化液对冻融后携带水痘-带疱疹病毒的2BS细胞的消化效果。实验中分别配制了0.125%和0.25%的胰酶，以及0.01%和0.02%的EDTA溶液，加入预先培养好的2BS细胞中进行消化。消化后，观察细胞形态，离心、浓缩、冻融并检测病毒滴度。

结果显示，与0.125%和0.25%胰酶、0.01%EDTA，0.25%胰酶和0.02%EDTA混合消化液相比，使用0.02%EDTA消化液消化水痘-带疱疹病毒的2BS细胞后，冻融后的病毒滴度提高了1.3～0.8个log值。因此，使用0.2%EDTA消化液消化含有水痘病毒的细胞可以获得最佳的病毒滴度。

参考文献

[1]Establishment and Maintenance of Human Embryonic Stem Cell Lines on Human Feeder Cells Derived from Uterine Endometrium under Serum-Free Condition1[J].Jung Bok Lee,Jeoung Eun Lee,Jong Hyuk Park,Sun Jong Kim,Moon Kyoo Kim,Sung Il Roh,Hyun Soo Yoon.Biology of Reproduction.2005(1)

[2]Wnt signalling inhibits neural differentiation of embryonic stem cells by controlling bone morphogenetic protein expression[J].Lorenz Haegele,Barbara Ingold,Heike Naumann,Ghazaleh Tabatabai,Birgit Ledermann,Sebastian Brandner.Molecular and Cellular Neuroscience.2003(3)

[3]Id proteins in development,cell cycle and cancer[J].Marianna B.Ruzinova,Robert Benezra.Trends in Cell Biology.2003(8)

[4]BMP Induction of Id Proteins Suppresses Differentiation and Sustains Embryonic Stem Cell Self-Renewal in Collaboration with STAT3[J].Qi-Long Ying,Jennifer Nichols,Ian Chambers,Austin Smith.Cell.2003(3)

[5]郝鹏博,谢秋红,杜岩,杨蕾蕾.比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析[J].中国实用医药,2011,6(21):60-61.