为了筛选小肠结肠炎耶尔森氏菌的生化反应，我们对克氏双糖铁培养基进行了改良。该培养基包含蛋白胨、酵母膏、牛肉粉等提供氮源、维生素和矿物质，山梨醇和葡萄糖提供可发酵糖类。硫代硫酸钠可以被某些细菌还原成H2S，与铁离子生成黑色硫化铁。酚红是pH指示剂，发酵糖产酸变黄，产碱变红。氯化钠用于维持均衡的渗透压。琼脂是培养基的凝固剂。
我们对克氏双糖铁培养基进行了改良，使其更适合筛选小肠结肠炎耶尔森氏菌。该菌是一种革兰氏阴性杆菌或球杆菌，大小为1-3.5×0.5-1.3μm，多单个散在，有时排列成短链或成堆。该菌不形成芽胞，无荚膜，有周鞭毛。需要注意的是，该菌的鞭毛只在30℃以下的培养条件下形成，温度较高时即丧失，因此在30℃以下才能观察到其有动力的表现。
该菌的生长温度为30-37℃，但在22-29℃才能使其某些特性出现。该菌在4℃时能保存和繁殖。世代时间较长，最短需要40分钟左右。在培养基上培养24小时后，菌落细小，直径增大到0.5-3.0mm。菌落圆整、光滑、湿润、扁平或稍隆起，透明或半透明。在肉汤中生长呈均匀混浊，一般不形成菌膜。
如果您想使用改良的克氏双糖铁培养基进行筛选小肠结肠炎耶尔森氏菌的生化反应，请按照以下方法操作：称取本品65.52g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装于试管，121℃高压灭菌15分钟，备用。
我们选择了小肠结肠炎耶尔森氏菌的ail基因作为靶基因，并利用在线引物设计软件设计了一对特异性引物。通过实时荧光监测仪，在62℃保温反应60分钟内对小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检测。
最终确定的实时荧光LAMP反应体系包括反应内引物FIP和BIP各3μmol/L，反应内引物F3和B3各0.5μmol/L，以及其他反应组分如2.5μL dNTPs，0.5mM MgSO4，2μL 10×Bst酶缓冲液，1μL BstDNA大分子聚合酶，1μL模板DNA，甜菜碱1mmol/L，荧光染料0.5μL，纯水补足体积到25μL。
我们对小肠结肠炎耶尔森氏菌和其他非小肠结肠炎耶尔森氏菌进行了实时荧光LAMP的检测。通过验证引物的特异性，阳性结果均为小肠结肠炎耶尔森氏菌株，而其他非小肠结肠炎耶尔森氏菌株结果均显示为阴性，说明我们设计的引物具有良好的特异性。
我们还对反应的灵敏度进行了研究，结果表明，实时荧光LAMP对小肠结肠炎耶尔森氏菌纯培养物的检测灵敏度可以达到61CFU/mL，比PCR方法高出10倍。对人工污染样品的检出限可以达到46CFU/mL。
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