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酶切大神看过来~?
生物医学工程
酶切大神看过来~?
请教大神,为什么质粒双酶切条带与单酶切条带相同?而且酶切过的条带在凝胶电泳图中比原始未酶切的质粒分子量要低很多?
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共2个回答
该死,,销售
2019-08-30回答
一般情况下,提取的质粒有三条带,超螺旋,线性,环装。超螺旋在电泳时速度最快,线性辞职,环装最慢(应该是这样的,我记不太清了,也懒得百度)。单酶切跟双酶切条带一致要看你中间被切掉的片段的大小。琼脂糖凝胶的分辨率没有那么高,差个几十甚至几百bp在低浓度的凝胶中根本看不出来的。如果你中间被切掉的片段小,单酶切跟双酶切的大小应该就是一致的。
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着妆,工程设计
2019-08-30回答
酶切条带相同,可能酶失活了一种或者位点有一个不存在。也有可能位点甲基化了需要转化JM110,也可能位点之间间隔很小,掉带十几bp肉眼不可见。至于大小差异需要知道质粒的几种形态,单位点切开的叫线性质粒,环状的超螺旋形态肯定比线性的要更复杂。所以在胶孔之中移动的比线性的要慢很多。这就是为什么大小看起来线性的要小了,所以判断质粒大小还要酶切之后做比较。超螺旋状态下偏大。
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