冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来?

 1.冻存液的配置方法：冻存液：10% DMSO + 90% FBS。但是这个比例各个实验室不一样，10%DMSO一般不怎么变，剩下90%可以根据自己情况调整，我用过10% DMSO + 20% FBS + 70% 培养基，也用过 10% DMSO + 90% FBS（现在在用），都可以，细胞复苏成活率都90%以上。先配好冻存液，放在4度，等临用前再加，DMSO在常温下对细胞损伤较大，很多人因此冻细胞时冻一批死一批。
另外，最好用程序降温盒（公司名称忘了），每分钟降一度。把加好的含有细胞的冻存液放到程序降温盒里，再放到-80度冰箱，6小时后取出，再放至液氮中
2.冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来？？ 我用两种规格的培养瓶，25和75 ，如果细胞都长满的情况下，可以分别冻存多少管呢？ 1.8ml 的冻存管
这个问题最好细胞计数后再冻存，经验这时候不靠谱，一般1百万/管，lml/管。

我们实验室没有程序冻存盒。我一般是要求这样做的，细胞间冻存的细胞放在4度，收拾好细胞间出来后放到-20度1-2h（我认为4h内应该都没有问题），然后移到-70度过夜后（这个时间可以长些没有关系，很多细胞冻存好的话，在-70度保存半年以上，复苏可以90%活的）可以转移到液氮罐里长期保存。我们通常1-2年复苏看看。
另外，如果买sigma的cell freezing medium应该不错的选择。关于细胞密度的话，对于买的冻存液，我们通常T25，4-6只（0.5mL）。还有，我在实验室通常要求，复苏的细胞在液体里传代10代内使用，通常split时间3-4天，做转染等实验是第三代开始。希望这些小的经验对你和大家有些启发。

我现在都是将4-5个冻存管用皮筋捆好，再裹上一层棉花，然后垂直方向再裹上一圈，保证管子所有地方都在棉花里，外面再用皮筋扎好。直接丢在-80冰箱。应该保存几个月还是没问题的。随便什么时候转移到液氮罐里。程序降温其实也就是为了保证慢一点降温，原理是一样的