辛卡利特是一种重要的胆囊素八肽，其制备方法备受研究人员的关注。
简介：辛卡利特是一种人工合成的胆囊素八肽，主要用于促胆囊收缩，胆囊诊断试剂，具有胆囊收缩素的全部生物活性。研究表明辛卡利特具有减轻肺脏间质水肿及白细胞浸润，抑制促炎细胞因子生成，改善肺组织结构损伤，改善血流动力学障碍，延缓平均动脉压下降和肺动脉压升高，改善肝肾微循环血流，回复心率，降低肺动脉高压，改善潮气量等作用。临床上可以用来治疗慢性胰腺炎，内毒素血症，内毒素休克，脓毒血症，多器官功能障碍综合症，全身性炎症反应综合征等。
合成：辛卡利特的制备方法主要有酶法和化学法两种。其中，酶法合成由于涉及酶制剂种类比较多、酶制剂价格昂贵，且中间产物分离困难、制备周期长，目前已不再使用酶法制备辛卡利特。化学合成是目前常用的辛卡利特制备方法。CN201410105423.X公开了一种制备辛卡利特的方法，该方法中选择了氨基树脂，在低温条件下用三氟乙酸裂解多肽树脂，虽然能减少磺酰基脱落，但是不能完全避免，而且会导致多肽裂解不完全，降低粗品收率；CN200810043920.6公开了一种制备辛卡利特的方法，该方法选择用氨水裂解多肽树脂，其中氨水有毒，对眼、鼻、皮肤有刺激性和腐蚀性，不利于后期产业化，而且选用的Fmoc-Asp
(odmab)-OH这一原料价格昂贵，增加了生产成本，没有显著的经济效益。CN201810365226.X公开了一种制备辛卡利特的方法，该方法也是选取了两肽片段树脂作为起始树脂，但是Asp1选择了Fmoc-Asp （Ome）-OH保护策略，在裂解后还需要水解去除Ome。
1. 专利CN 110317257 A发明了涉及一种辛卡利特固液相结合的合成方法，主要解决现有技术存在的原料昂贵以及后处理繁琐的技术问题。具体步骤为：
（1）Fmoc-Asp（Otbu）-Osu，NH 2 -Phe-CONH 2 溶于四氢呋喃中，加入DIEA，搅拌反应2小时，旋蒸除去四氢呋喃，加入体积比95%TFA溶液搅拌反应1-2小时，去除叔丁基，再加乙醚结晶得到Fmoc-Asp- Phe-CONH 2 二肽片段；
（2）将二氯三苯基氯树脂置于圆底烧瓶中，加入Fmoc-Asp-Phe-CONH 2 二肽片段，加入二氯甲烷，DIEA，搅拌反应2小时，再加入甲醇震荡反应30分钟，过滤除去滤液；用二氯甲烷洗涤树脂三次，干燥，得到Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH 2 ；
（3）将Fmoc-Asp（β-2Cl-Trt Cl 树脂）-Phe-CONH 2 置于多肽反应器中，加入脱保护试剂，氮气搅拌反应30分钟，抽干，再用DMF洗涤5次，加入相应的保护氨基酸，HBTU/NMM为缩合剂，DMF做溶剂，反应30-60分钟，茚三酮检测反应终点，反应结束后抽真空排干反应液，用DMF洗涤3次，再加入脱保护试剂，依次循环，直至连完最后一个天冬氨酸，脱保护，得到辛卡利特树脂肽；
脱保护试剂为体积比20%哌啶/DMF溶液，反应中所提到保护氨基酸依次是Fmoc-Met-OH，Fmoc-Trp-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Tyr(SO 3 h)-OH，Fmoc-Asp(Ofm)-OH；
（4）将辛卡利特树脂肽置于圆底烧瓶中，加入裂解试剂，常温条件下反应1小时，抽滤滤去树脂颗粒，收集滤液，减压浓缩旋去溶剂，得到辛卡利特中间体；再经高液相色谱分离纯化、冻干后得到辛卡利特精品。
2. CN 108059665 B发明了一种辛卡利特的制备方法，主要解决现有酶法制备存在的试剂难以去除以及化学法存在的产品性能不稳定、收率不理想的技术问题。该方法包括如下步骤：（1）将固相合成所得的粗肽用氨水充分溶解，过超滤柱；（2）连接超滤柱与高压单泵，选用醋酸水作为淋洗剂，得到去TFA盐的辛卡利特粗品中间液体；（3）对去TFA盐的辛卡利特粗品中间液体用NH 4 HCO 3 溶液调节pH值为7.25；（4）将辛卡利特粗品中间液体，用固定相为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶柱，流动相为A相0.2%醋酸水溶液与B相乙腈溶液，纯化得到高纯的醋酸盐形式的辛卡利特液体；（5）将得到的醋酸盐形式的辛卡利特液体浓缩冻干，最终得到含量超过98.5%的固体辛卡利特。
参考文献:
[1] 吉尔生化(上海)有限公司. 一种辛卡利特的制备方法:CN201711282755.5[P]. 2021-05-18.
[2] 吉尔生化(上海)有限公司. 一种辛卡利特的固液相合成法:CN201910474762.8[P]. 2019-10-11.
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