如何使用植物多酚氧化酶(PPO)ELISA试剂盒测定多酚氧化酶(PPO）水平? ¹

植物多酚氧化酶(PPO)ELISA试剂盒是一种用于测定标本中多酚氧化酶(PPO）水平的双抗体夹心法。该试剂盒利用纯化的多酚氧化酶(PPO）抗体包被微孔板，形成固相抗体。然后，将多酚氧化酶(PPO）加入包被单抗的微孔中，并与HRP标记的多酚氧化酶(PPO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后，加入底物TMB进行显色。颜色的深浅与样品中的多酚氧化酶(PPO）呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中多酚氧化酶(PPO）浓度。

如何操作？

1.标准品的加样：在标准品孔和样本孔中加入不同浓度的标准品。

2.加样：在空白孔和待测样品孔中加入样品稀释液和待测样品。

3.加酶：每孔加入酶标试剂。

4.温育：封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5.配液：将浓缩洗涤液稀释后备用。

6.洗涤：揭掉封板膜，加入洗涤液进行洗涤。

7.显色：加入显色剂A和显色剂B进行显色。

8.终止：加入终止液终止反应。

9.测定：以空白孔为基准，使用酶标仪测量各孔的吸光度（OD值）。

该试剂盒的应用领域是什么？

它如何用于小麦籽粒多酚氧化酶的研究？

多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase,PPO）是导致面制食品酶促褐变的主要因素。为了选育低PPO活性品种，需要快速、准确地检测小麦籽粒PPO活性，并研究PPO的生化特性以及控制基因与活性的关系。研究使用了24个小麦品种，探讨了以邻苯二酚代替L-DOPA检测小麦籽粒PPO活性的可能性，并验证了196个小麦品种。此外，还分析了小麦PPO的酶学特性、籽粒发育和萌发过程中同工酶的变化，以及化学试剂对小麦品种籽粒PPO活性的影响。通过分析基因序列和等位基因变异，初步探讨了内含子对PPO活性的影响，并提出了内含子参与PPO基因表达调控的可能性。

参考文献

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