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大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒的原理和应用? 1

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背景信息

大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒是一种用于检测S100蛋白浓度的实验工具。该试剂盒利用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体。在实验过程中,我们依次向包被抗体的微孔中加入标本或标准品、生物素化的抗体、HRP标记的亲和素,并经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的S100蛋白浓度呈正相关。我们可以使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),从而计算样品的浓度。

大鼠S100蛋白(S-100)是S100蛋白质家族的一员,含有2个EF手钙结合基序。该蛋白质主要存在于大量细胞的细胞质和/或细胞核中,并参与多种细胞过程的调控,如细胞周期进程和分化。S100基因包括至少13个成簇排列在1q21号染色体上的成员,但该基因位于21q22.3。该蛋白可能在神经突延伸、黑色素瘤细胞增殖、Ca2+通量的刺激、PKC介导的磷酸化、星形胶质细胞增多和轴突增殖以及微管组装的抑制中发挥作用。该基因的染色体重排和表达的改变与多种神经系统疾病、赘生性疾病和其他类型的疾病有关,包括阿尔茨海默氏病。

应用领域

大鼠骨髓基质细胞向Schwann细胞分化的研究

本研究旨在探究大鼠骨髓基质细胞在体外条件下向Schwann细胞分化的基础知识。我们从成年SD大鼠的股骨和胫骨中分离培养MSCs,并利用MTT法检测细胞的活力,FCM检测细胞周期和CD分子等方法研究MSCs的特性。结果表明,在体外环境中,MSCs易于扩增,经过1-8代的传代,细胞增殖能力无明显变化。未经诱导的MSCs大部分处于G0/G1期,G0/G1期的细胞所占百分比平均高于80%。骨髓基质细胞表达CD29(+)、CD11b(-)、CD90(+)等特征。

本实验采用复合诱导因子BME、RA、FSK、bFGF、PDGF、HRG体外连续诱导MSCs向Schwann细胞样细胞分化。诱导分化后,我们采用免疫荧光细胞化学染色、流式细胞仪、Western Blot、ELISA和逆转录PCR等方法检测Schwann细胞的标记蛋白S100蛋白及其mRNA的表达。结果显示,诱导分化后的MSCs在形态上发生了类似Schwann细胞的变化。MSCs在诱导过程中S100的mRNA表达呈上升趋势;通过免疫荧光方法观察到诱导后MSCs表达S100蛋白增强;通过Western Blot和流式细胞仪进一步定量检测到MSCs表达S100蛋白增高。此外,我们还通过基因组学方法分析了MSCs诱导过程中基因谱的表达变化。

参考文献

[1] Mercedes Zurita, Jesús Vaquero, Santiago Oya, Miriam Miguel. Schwann cells induce neuronal differentiation of bone marrow stromal cells. NeuroReport. 2005(5).

[2] Francis Burrows, Hong Zhang, Adeela Kamal. Hsp90 Activation and Cell Cycle Regulation. Cell Cycle. 2004(12).

[3] Asim Mahmood, Dunyue Lu, Michael Chopp. Marrow Stromal Cell Transplantation after Traumatic Brain Injury Promotes Cellular Proliferation within the Brain. Neurosurgery. 2004(5).

[4] Adeela Kamal, Marcus F Boehm, Francis J Burrows. Therapeutic and diagnostic implications of Hsp90 activation. Trends in Molecular Medicine. 2004(6).

[5] 李文婷. 大鼠骨髓基质细胞在体外条件诱导下向Schwann细胞分化的基础研究[D]. 中国协和医科大学, 2006.

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