辣根过氧化物酶的应用及其特点？ ¹

背景信息^[1-3]

兔抗辣根过氧化物酶抗血清是一种高纯度的免疫血清，通过多次免疫健康雄性白兔制备而成。辣根过氧化物酶是一种常用的酶，通常来源于辣根。它不仅广泛应用于生化检测项目，还被广泛运用于免疫类试剂盒。作为试剂盒显色体系的关键成分，过氧化物酶对试剂盒的质量起着重要影响。

辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）具有比活性高、稳定性好、分子量小、制备简单等特点，因此被广泛使用。HRP广泛分布于植物界，尤其是辣根中含量较高。它是一种由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量约为18%。HRP由多个同工酶组成，分子量约为40,000，等电点为PH3～9。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右（最高可达3.4）。RZ值越小，非酶蛋白的含量就越高。

辣根过氧化物酶的应用^[4][5]

用于环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究

本研究通过改造半抗原、修饰抗原以及免疫动物产生抗体等方法，建立了一种灵敏、简便、快速的环境荷尔蒙检测手段。研究重点针对雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A等环境荷尔蒙进行了分析方法研究。

主要研究内容如下：

1. 对雌二醇进行了修饰，引入了连接臂，并与牛血清蛋白结合，合成了完全抗原。测定结果显示，抗原中雌二醇与蛋白质的结合比为25：1。利用制备的完全抗原免疫大耳白家兔，制备了抗雌二醇多克隆抗体。ELISA测定结果显示，抗血清的中点效价为1：25000，与雌酮的交叉反应率为5％，与雌三醇的交叉反应率为2％，与孕酮的交叉反应率为＜0.1％。抗体具有较高的特异性。

2. 引入生物素-亲合素放大系统，以辣根过氧化物酶标记的亲合素作为探针，邻苯二胺作为辣根过氧化物酶的底物，建立了一种新的电化学酶免疫分析方法，用于测定雌二醇。该方法的线性范围为50.0-500.0 pg/mL，检出限为21.0 pg/mL。与传统的光度检测的ELISA相比，该方法具有更高的灵敏度和更低的检出限。

参考文献

[1] Determination of endocrine-disrupting phenols, acidic pharmaceuticals, and personal-care products in sewage by solid-phase extraction and gas chromatography–mass spectrometry[J]. Hing-Biu Lee, Thomas E. Peart, M. Lewina Svoboda. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[2] Determination of bisphenols in sewage based on supramolecular solid-phase extraction/liquid chromatography/fluorimetry[J]. Antonia Moral, María Dolores Sicilia, Soledad Rubio, Dolores Pérez-Bendito. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[3] Liquid chromatography–tandem mass spectrometry analysis of estrogenic compounds in coastal surface water of the Baltic Sea[J]. Iris-Constanze Beck, Regina Bruhn, Juergen Gandrass, Wolfgang Ruck. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[4] Analyses of phenolic endocrine disrupting chemicals in marine samples by both gas and liquid chromatography–mass spectrometry[J]. James D. Stuart, Christopher P. Capulong, Katherine D. Launer, Xuejun Pan. Journal of Chromatography A. 2005(1)

[5] 王术皓. 环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究[D]. 东华大学, 2006.