在这篇文章中,我们将探讨使用咪唑乙醇合成抑霉唑人工抗原的有效方法。这种方法不仅具有实践价值,还对于生物催化和手性化合物合成的相关领域有着潜在的应用和发展前景。
简述:alpha-(2,4-二氯苯基)-1H-咪唑-1-乙醇(咪唑乙醇),英文名称:α-(2,4-Dichlorophenyl)-1H-imidazole-1-ethanol,CAS:24155-42-8,分子式:C11H10Cl2N2O。咪唑乙醇常用作制备咪康唑的中间体,还是芬康唑合成和酮康唑合成中的杂质。
1. 分离手性对映体:
滕怀凤等人建立手性HPLC法分离咪唑乙醇5种这种手性药物对映体。实验方法如下:
(1)色谱条件:
色谱柱为Chiralcel OJ-H (150 mm × 4.6 mm,5 μm,日本Daicel公司),流动相为不同比例的正己烷-乙醇/正丁醇,检测波长为230 nm,柱温为25 ℃,流速为1.0 mL·min-1,进样量为20 μL。
(2)供试品溶液的制备
精密称取咪唑乙醇消旋药物适量,用无水乙醇溶解并制成质量浓度为1.0 g·L-1的储备液,4 ℃保存。精密量取储备液适量,用无水乙醇稀释制成质量浓度为0.1 g·L-1的溶液,过0.45 μm微孔滤膜,即得。
2. 应用:合成抑霉唑人工抗原
以咪唑乙醇为原料,与6-溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应可合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4-二氯苯基)- 2-(1-咪唑基)乙氧基]己酸)。具体步骤如下:
(1)6-[1-(2,4-二氯苯基)- 2-(1-咪唑基)乙氧基]正己酸乙酯的制备
2.1g咪唑乙醇溶解于3mL DMF中,0.37g 60%的 NaH悬浮于10mL的四氢呋喃后加到咪唑乙醇溶液中,52℃ 恒温回流搅拌1.5h后于15℃水浴加入2.5g 6-Br-(CH2)5COOC2H5,回流搅拌反应过夜。次日将产物过滤、浓缩后用硅胶层析提纯(洗脱剂、己烷、乙酸乙酯体积比为3:1)收集得到产物①。产物用薄层色谱法(t h i n l a y e r chromatography,TLC)初步检测,经硅胶进一步纯化 并用核磁共振鉴定。
(2)6-[1-(2,4-二氯苯基)-2-(1-咪唑基)乙氧基]己酸的制备
称取1.4g的产物①用体积分数50%的乙醇溶液稀释成40mL,然后加入4mmol/mL的NaOH溶液5mL,室温搅拌反应1.5h,将反应混合液浓缩后加30mL蒸馏水到浓缩液中,用乙酸乙酯萃取,水相用稀盐酸调pH6.5 后用氯仿萃取。氯仿层用水润洗后经无水硫酸镁干燥,过滤后将滤液浓缩结晶得到产物②。
(3)抑霉唑人工抗原(HIA-BSA、HIA-OVA)的合成
称取74.2mg产物②溶于1mL的DMF中,加入23mg NHS和41.3mg DCC,室温搅拌反应4h后10000r/min离心15min,取0.5mL的上清液分别逐滴加入溶有100mg BSA和100mg OVA的10mL硼酸缓冲液(pH9.0)中,室温搅拌反应1h后于4℃搅拌过夜。次日取出,在4℃条件下用p H7.4磷酸盐缓冲液透析3d,每天换液3次。透析液于10000r/min离心5min,取上清液冷冻干燥成粉末-20℃保存备用。
参考文献:
[1]姚周麟,章虎,吴韶辉等. 抑霉唑手性异构体及其代谢物在柑橘贮藏中的选择性行为 [J]. 农药学学报, 2022, 24 (01): 142-151. DOI:10.16801/j.issn.1008-7303.2021.0141
[2]滕怀凤,温晓丽. Chiralcel OJ-H 柱分离五种咪唑类药物异构体 [J]. 沈阳药科大学学报, 2020, 37 (06): 501-505. DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2020.06.004
[3]周映霞,张丽杰,潘家荣等. 杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定 [J]. 食品科学, 2010, 31 (13): 184-188.