一、简介： 维生素c早在1907年即被发现具有预防及治疗坏血病(scurvy)之功效，故在 学上称为抗坏血酸(ascorbic acid) ，然其化学结构直到1932年才被 定出来。天然的维生素c 对平面偏极光成左旋性，而在 学上可分为还原型的l-抗坏血酸(l-dehydroascorbic acid)两称，但氧型化的维生素c极易被水解，破坏其环内酯(lactone)结构而失去活性，所以，市售维生素c均为还原型的左旋维生素c。 二、原理： 还原型抗坏血酸能还原染料2.6-二氯酚靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原後红色消失。还原型抗坏血酸还原2.6-二氯酚靛酚後，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标 2.6-二氯酚靛酚的量与样品中所含维生素c的量成正比。 三、试剂： (1)2％草酸溶液：溶解20克草酸结晶于200毫升水中，然後稀释至1000ml。 (2)1％草酸溶液：取上述2％草酸溶液500ml，用水稀释至1000m1。 (3)抗坏血酸标 溶液： 确称取20mg抗坏血酸，溶于1％草酸溶液中，移入10ml量瓶中， 用1％草酸溶液稀释至100毫升，混匀，置冰箱中保存。 使用时吸取上述抗坏血酸5ml，置于50毫升容量瓶中，用1％草酸溶液定容之。此标 使用液每毫升含0.02mg维生素c。 标定：吸取标 使用液5m1于三角烧瓶中，加入6％碘化钾溶液0.5ml，1％ 粉溶液3滴，再以0.001n碘酸钾标 溶液滴定，终点 淡蓝色。 计算如下： 抗坏血酸浓度（mg/ml）=( v1×0.088)/v2 v1：滴定时所耗0.001n碘酸钾标 溶液的量(ml) v2：所取抗坏血酸的量(ml) 0.088：1ml 0.0001n碘酸钾标 溶液相当于抗坏血酸的量(mg／m1) (4)2.6：二氯靛酚溶液：称取碳酸氢钠52mg，溶于200ml沸水中，然後称取2.6-二氯靛酚50mg，溶解在上述碳酸氢钠的溶液中，待冷，置于冰箱中过夜，次日过滤置于250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此液应贮于棕色瓶中 冷藏，每星期至少标定1次。 标定方法：取5m1已知浓度的抗坏血酸标 溶液，加入1％草酸溶液5ml，摇匀，用上述配 的染料溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒不褪色 止 每毫升染料溶液相当于vc的毫克数=滴定度(t)=(c×v1)/v2 式中： c；抗坏血酸(v)的浓度(mg／m1) vl：抗坏血酸的量(m1) v2：消耗染料溶液量(m1) (5)0.1n碘酸钾溶液：精确取乾燥的碘酸钾0.100ml。0.3567克用水稀释至100ml. (6)0.001n碘酸钾溶液：吸取0.1n碘酸钾溶液1ml，用水稀释至100毫升。此溶液1ml相当于抗坏血酸0.088mg。 (7)1％ 粉溶液。 (8)6％碘化钾溶液。 四、操作方法： 1、称取适量(50.0-100.0克)样品，加等量的2％草酸溶液，倒入组织捣碎机中捣成匀浆。称取10.00-30.00克浆状样品(使其含有抗坏血酸1-5mg)，置于小烧杯中，用1％草酸溶液将样品移入100毫升容量瓶中， 稀释至刻度，摇匀。 2、将样液过滤，弃去最初毫升滤液。若样液具有 色，用白陶土(应选择脱色力强但对抗坏血酸无损失的白陶土)去色，然後迅速吸取5-loml滤液，置于50ml三角烧瓶中，用标定的2.6-二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉红色于15秒内不褪色 止。 计算： 每百克样品中抗坏血酸毫克数＝(v .t)/w×100 v：滴定时所耗去染料溶液的量(ml)； t：1ml染料溶液相当于抗坏血酸标 溶液的量(mg) w：滴定时所取的滤液中含样品量(g)． 五、说明： (1)所有试剂配 最好用重蒸馏水。 (2)样品取样後，应浸泡在已知量2％草酸溶液中使抗坏血酸受损失。以免发生氧化，使抗坏血酸受损失。 (3)对动性的样品可用10％三氯醋酸代替2％草酸溶液提取；对含有大量fe的样品，如储藏过久的罐头食品可用8％醋酸溶液代替草酸溶液提取。 (4)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。 (5)若样品滤液无色，可不加色陶土。须加白陶土的，要对每批新的白陶土测定回收率。加白陶土脱色过滤後，样品要迅速滴定。 (6)滴定开始时，染料溶液要迅速加入，直至红色不立即消失而後尽可能一滴一滴地加入， 要不断振动三角烧瓶，直至呈粉红色于15秒内不消失 止。样品中可能有其他杂质也能还原2.6-二氯靛酚，但一般杂质还原该染料的速度均较抗坏血酸慢，所以滴定时以15秒 红色不褪 终点。 (7)测定样品溶液时必须同时作一空白对照，样品溶液滴定的毫升数须扣除空白液滴定的毫升数。 参考资料 gb 6195 86 水果、蔬菜维生素c含量测定法（2,6－二氯靛酚滴定法）
