跨专业读的,分子小白,实验室的人有比较忙,自己的问题有比较奇葩而且很小白,有时候会被说,所以想在线上问问大家:
分子入门,在构建载体,1. 请问酶切位点该怎么选择,用普通内切酶和快酶应该怎么做反应体系?反应条件分别是什么样的
2. 连接之后就是普通质粒了吧,应该是做质粒扩繁的那个工作(或者叫大肠杆菌转化?),应该怎么选择哪个菌落才是自己想要的,外观看不出来啊,是要测序才行吗?
3. 我要改造载体,目的基因连上去以后还要连接启动子,启动子序列一般多长啊,启动子和目的基因之间可以有酶切位点吗,我看到有的文章中是有的,是不是也可以有一段载体的骨架序列?如果可以的话,启动子和目的基因之间的骨架序列可以有多长?
4. 如果我想比较系统的学习入门分子生物学实验方法,比如说最基础的载体构建、农杆菌转化、质粒提取、质粒酶切、连接、同源重组等;以及比较复杂的Southern、Western、IP、Pulldown、BIFC、酵母双杂、酵母单杂等,可以去哪儿学啊,实验室的毕业论文根本都没什么接受,材料方法部分几乎知识说了做了哪些实验而已,根本没有具体的操作步骤。