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克隆做不出来了求大神指导？

链接一个10kb的载体和4.8kb 的片段用诺维赞的重组酶做了好几次还是没做出来
实验设计反复检查了也让别的同学帮忙检查了没有问题，同源臂都是20bp左右 vector 双酶切使用过很多次了确定没有问题片段是PCR扩增出来的大小也对还测序确认了两头同源臂是对的。还是做不出来…

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共4个回答

把你的下游引物序列和载体序列发出来看看

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模版换换试试

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我们做的时候，一般两个片段量会加倍加入。另外，感受态有问题不？
转个质粒同时做的没问题

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模版换换试试
模版测序确认过

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