高效液相色谱法测定大豆异黄酮的含量 方法1： 1.1仪器 采用岛津高效液相色谱仪系统，包括：lc－10at溶剂输送泵（两台）、spd－10avvp紫外检测器、cto－10avp柱温箱、dgu－12a自动脱气机、scl－10avp系统控制器、c－r8a积分仪。 1.2试剂 乙腈、甲醇：色谱纯；水：自备超纯水；样品制备用溶剂为分析纯；异黄酮标准品daidzin、genistin、daidzein、genistein购自sigma公司。 1.3样品预处理 1.3.1标准品溶液的配制 精确称取各标准品2.0－4.0mg，置于10ml的烧瓶中，分别加入色谱级甲醇，超声波助溶，移入10ml容量瓶中并定容至刻度，于40c温度下保存备用。 1.3.2样品溶液的制备 精确称取5mg左右的大豆异黄酮样品，置于10ml小烧杯中，加入80%的乙醇溶液，超声波助溶，移入10ml容量瓶中并定容至刻度，转入hplc专用小瓶中封口，备测。 1.3.3色谱条件 色谱柱：lichrosper 100rp-18(4.6mm×25mm；5μm)；流动相：含0.1%（v/v）冰醋酸的水溶液（a溶液），含0.1%（v/v）冰醋酸的乙腈溶液（b溶液）；时间程序：在35min内b溶液浓度从20%线性递增至40%；流量：1ml/min；检测波长：254nm；柱温：400c；进样量：5μl；分析时间：35min/样品。 方法2 2.1仪器 高效液相色谱仪：岛津lc－6a型泵，紫外检测器spd－6av，自动进样器sil－6a，数据处理装置c－r3a。 2.2试剂 甲醇：色谱纯；水：重蒸水；样品制备用酒精为分析纯；异黄酮标准品daidzin、genistin、daidzein、genistein购自sigma公司。 2.3样品预处理 2.3.1标准品溶液的配制 精确称取各标准品2.0－4.0mg，置于10ml的烧瓶中，分别加入80%酒精，超声波助溶，移入10ml容量瓶中并定容至刻度，于40c温度下保存备用。 2.3.2样品溶液的制备 精确称取5mg左右的大豆异黄酮样品，置于10ml小烧杯中，加入80%的乙醇溶液，超声波助溶，移入10ml容量瓶中并定容至刻度，转入hplc专用小瓶中封口，备测。 2.3.3色谱条件 色谱柱：日本岛津公司，shim-pack clc ods柱（150×6.0mm id；5μm）；流动相为甲醇：醋酸：水＝30：3.5：66.5；流速为0－8.5min时1.0ml/min，8.5－47min时1.5ml/min；柱温：500c；检测波长：254nm。 注：以上两种方法仅能测出大豆甙（daidzin）、大豆甙元（daidzein）、染料木甙（genistin）和染料木素（genistein）四种成份的含量。 方法3 3.1仪器 高效液相色谱仪：安捷伦hp1100，紫外检测器，四元泵，手动进样器。 3.2试剂 甲醇：色谱纯；水：重蒸水；样品制备用酒精为分析纯；异黄酮标准品大豆甙（daidzin）、黄豆甙（glycitin、染料木甙（genistin）、大豆甙元（daidzein）、黄豆甙元（glycitein）、染料木素（genistein）购自美国sigma公司。 3.3样品预处理 3.3.1标准品溶液的配制 精确称取各标准品2.0－4.0mg，置于10ml的烧瓶中，分别加入80%酒精，超声波助溶，移入10ml容量瓶中并定容至刻度，于40c温度下保存备用。 3.3.2样品溶液的制备 精确称取3.0－4.0mg左右的大豆异黄酮样品，置于10ml小烧杯中，加入80%的乙醇溶液，超声波助溶，移入10ml容量瓶中并定容至刻度，转入hplc专用小瓶中封口，备测。 3.3.3色谱条件 色谱柱：美国安捷伦公司，zorbax eclipe xdb-c18柱（150×6.0mm id；5μm）；流动相：色谱级甲醇（a），含5%（v/v）冰醋酸的水溶液（b），流动相梯度见附表；流速：1.0ml/min；柱温：200c；检测波长：254nm。 1.)雌激素样作用(表现为类雌激素活性或抗雌激素活性、延缓衰老) 预防骨质疏松症(通过与破骨细胞上的雌激素受体结合，降低破骨细胞活性，还能阻止破骨细胞酸分泌，使骨质流失减少，增强骨密度，预防骨质疏松，此外还能增强机体对钙的吸收。)(由于骨代谢失衡，破骨量大于成骨量所致，破骨细胞的分化或其功能的改变所导致的骨改建失衡是重要病理基础。 2.)抗氧化作用(消除人体多余的自由基，保持白嫩肌肤、延缓衰老) 可作为阿法林的拦截 3.)抑制肿瘤作用(抑制一些激素依赖性肿瘤的产生，如乳腺癌、子宫内膜癌等) 4.)心血管保护作用(降低胆固醇、调节血脂，预防心血管疾病；降低血液浓度，防止特定类型蛋白质在大脑中沉积，从而预防老年性痴呆的产生) 5.)人体内雌激素水平低时，大豆异黄酮占据空乏的雌激素受体，发挥弱雌激素效应，从而表现出提高雌激素水平的作用，可防治一些和激素水平下降有关的疾病，如衰老、更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；当人体内雌激素水平高时，大豆异黄酮以"竞争"方式占据受体位置，同样发挥弱雌激素效应，但由于它的活性仅为体内雌激素的2%，因而从总体上表现为降低体内雌激素水平的作用，即抗雌激素活性，可预防激素依赖型肿瘤及心血管疾病的发生。这就是着名的大豆异黄酮对雌激素的双向调节作用机制。
