新霉素是一种氨基糖苷类抗生素，具有广谱活性，能够抑制细菌核糖体的蛋白质合成。它对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有效，尤其对金葡萄、白喉杆菌和炭疽杆菌的作用更为明显。与其他抗生素相比，新霉素与卡那霉素完全交叉抗药性，与链霉素有部分交叉抗药性。
口服新霉素适用于治疗感染性腹泻、抑制结直肠手术患者的肠道细菌群落、降低结肠细菌以及肝性脑病中氨的产生。局部给药的新霉素可用于治疗烧伤、创伤和溃疡，以及外耳炎滴耳液。
新霉素有多种剂型，包括500 mg的口服片剂。标准成人剂量为每日1至3 g，分四次服用。由于新霉素可能被身体吸收，并且具有较高的耳毒性和肾毒性，因此长期用药应避免。其他不良事件包括恶心、腹泻和艰难梭状芽孢杆菌小肠结肠炎。
新霉素可用于体外培养，用于选择性筛选细菌克隆。
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