摘要：
Giemsa染色作为一种常用的生物学染色技术，其原理基于染色剂与细胞和组织中不同成分的选择性结合。通过这种选择性染色，Giemsa染色技术能够使细胞和组织的各种结构和细节得以清晰可见。
简介：
吉姆萨染色法得名于一位德国化学家，因为他应用了多种试剂组合来证明疟疾中寄生虫的存在。它属于一组称为罗曼诺夫斯基染色法的染色法。这些中性染色法由氧化亚甲蓝、天青和伊红 Y 的混合物组成，并在用甲醇固定的空气干燥载玻片上进行。罗曼诺夫斯基染色法用于细胞分化、血液和骨髓膜等样本的病理检查以及寄生虫（例如疟疾）的展示。
吉姆萨染色法最初用于检测血液涂片中是否有疟原虫，现在也用于组织学中常规检查血液涂片。它是最常用的显微镜染色剂之一，因此在血液学中，它已广泛用于血液和骨髓标本、细菌学、临床细胞学标本、组织活检和肿瘤样本。
1. 吉姆萨染色原理
吉姆萨染色剂是一种鉴别染色剂，其成分包括伊红染料、亚甲蓝和天青。它特异性地与 DNA 的磷酸基团结合，并在具有高浓度腺嘌呤-胸腺嘧啶相互作用的区域进行结合，这是 DNA 的特征。
天青和伊红都是酸性染料，可以在细胞的基本成分（如细胞质和颗粒）上留下不同程度的染色。亚甲蓝是一种碱性染料，负责染色细胞的酸性成分，特别是细胞核。除了作为细胞染色剂的作用外，甲醇还可用于“固定”图像。由于固定剂的作用，细胞能够粘附在玻璃载玻片上，从而防止细胞发生任何其他变化。
2. 吉姆萨染色原理的应用
（1）Wright-Giemsa’s stain 通常用于显示外周血和骨髓涂片中的细胞成分。吉姆萨染色用于获得白细胞分类计数。它还用于区分各种血细胞（如血小板、红细胞和白细胞）的细胞核和细胞质形态。
（2）在微生物学中，吉姆萨染色用于染色沙眼衣原体、伯氏疏螺旋体中的包涵体，如果没有韦森染色，则用于染色鼠疫耶尔森氏菌。吉姆萨染色还用于染色荚膜组织胞浆菌、耶氏肺孢子菌、肉芽肿克雷伯氏菌、马尔尼菲篮状菌（以前称为马尔尼菲青霉菌），有时也用于染色细菌荚膜。
在微生物学中，这种染色剂最常用于寄生虫学，以检测红细胞内 (疟原虫、巴贝斯虫) 和红细胞外 (锥虫、微丝蚴) 寄生虫。它还用于检测利什曼原虫或克氏锥虫的细胞内无鞭毛体。
（3）细胞遗传学也使用这种染色剂来染色染色体并识别染色体畸变。它通常用于 G 显带 (Giemsa-Banding)。其原理是：染色体经胰蛋白酶处理后，使用吉姆萨染料染色后会呈现出深浅不同的带型，人类的24种染色体可显示出各自特异的带纹。
吉姆萨染色用于观察染色体，这对于检测巨细胞病毒感染尤其重要，因为这种感染的典型表现是“猫头鹰眼”病毒内含物，如下图所示：
3. 细胞成分 - 染色后观察到的颜色
红细胞：淡紫色
中性粒细胞：红紫色
嗜酸性粒细胞：紫色细胞核和红色至橙色颗粒
嗜碱性粒细胞：紫色细胞核和蓝色粗颗粒
淋巴细胞：深蓝色细胞核
血小板：紫罗兰色颗粒
宿主细胞核：深紫色
白细胞核：深紫色
宿主细胞的细胞质：淡蓝色
白细胞的细胞质：淡蓝色或灰蓝色
黑色素颗粒：黑绿色
细菌：淡蓝色或深蓝色
螺旋体疏螺旋体：淡紫色
疟疾寄生虫：红色或粉红色细胞核和蓝色细胞质
单核细胞：粉红色细胞质
4. 优化吉姆萨染色技术
（1）影响染色结果的因素
要通过吉姆萨染色获得一致可靠的结果，需要注意几个因素。首先，血膜本身的质量至关重要。准备不当的涂片会导致染色不均匀或细胞形态不佳。此外，染色溶液及其应用也会对结果产生重大影响。太旧或稀释不当的染色会导致染色不足或背景着色过多。固定时间和冲洗程序等因素也会影响最终产品。
（2）实现一致和可靠染色的技巧
实现一致吉姆萨染色的技术包括精心准备和遵守标准化协议。血涂片应根据既定准则进行风干或甲醇固定。每次染色时都应使用新鲜制备的吉姆萨染色工作稀释液，缓冲至特定 pH 值。标准化染色时间和冲洗步骤可确保可重复性。此外，一些方案结合了带有摇动机制的染色科普林罐，以促进染色均匀分布。
（3）解决常见染色问题
常见的染色问题往往可以归结为特定因素。染色浅可能是由于染色浓度不足或染色时间不足造成的。相反，染色过深可能表明染色浓度过高或染色时间过长。染色不均匀可能是由于冲洗不充分或染色不均匀造成的。通过识别问题并调整相应因素，可以优化吉姆萨染色，以产生清晰、信息丰富的显微图像。
5. 结论
Giemsa染色技术的原理在于其染色剂与细胞和组织中不同成分的特异性结合，从而使细胞结构得以清晰可见。这种简单而有效的染色方法在生物学研究和医学诊断中发挥着关键作用，为科学家们提供了观察和分析生物体内部结构的重要工具。
参考：
[1]https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain/
[2]https://www.creative-bioarray.com/support/giemsa-staining-protocol.htm
[3]https://microbenotes.com/giemsa-stain-principle-procedure-results-interpretation/
[4]https://www.macsenlab.com/blog/giemsa-stain-overview/
[5]https://sharebiology.com/giemsa-staining-an-overview-principle-and-applications/
[6]https://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-62703-706-8_3
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