如何正确使用DNaseI核酸内切酶进行RNA样品处理? ¹

核酸内切酶是一类水解酶，它们在催化水解多核苷酸方面具有专一性。这些酶对于DNA和RNA的代谢和修复非常重要。

DNaseI是一种核酸内切酶，它可以消化单链或双链DNA并产生单脱氧核苷酸或寡脱氧核苷酸。DNaseI的活性受到钙离子的依赖，并可以被镁离子或二价锰离子激活。在镁离子存在的条件下，DNaseI可以随机剪切双链DNA的任意位点；在二价锰离子存在的条件下，DNaseI可以在同一位点剪切DNA双链并形成平末端或粘末端。

DNaseI核酸内切酶不含RNase，因此可以用于处理各种RNA样品。它可以用于制备不含DNA的RNA样品，去除可能的DNA污染，去除RNA转录后的DNA模板，研究DNA-蛋白质相互作用，进行缺口平移，产生DNA随机片段文库，以及在细胞凋亡TUNEL检测中作为阳性对照。

如何正确使用DNaseI核酸内切酶？

1）通常情况下，加热操作就可以失活DNaseI。如果需要去除残留的变性蛋白，可以在37°C消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA样品，而不进行加热操作。

2）在进行加热失活之前，必须加入含有螯合剂的10×RDStopBuffer来去除二价阳离子。否则，在加热失活过程中，RNA可能会被降解。

3）在进行一步反转录反应时，添加DNaseI的量应该小于样品总体积的20%。例如，在20μl的反转录体系中，DNaseI的添加量应该小于4μl。

参考资料：

[1] 诊断学大辞典