人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒的应用及原理？ ¹

人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒是一种用于定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人CD4分子（CD4）含量的试剂盒。

实验原理和方法

人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。首先，在预先包被人CD4分子（CD4）捕获抗体的微孔中加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体。然后，经过温育和洗涤步骤后，使用底物TMB进行显色反应。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的人CD4分子（CD4）含量呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），并计算样品的浓度。

试剂盒组成

样本处理方法

1. 血清：将全血标本放置于室温2小时或4℃过夜后，以1000g离心20分钟，取上清进行检测。也可以将标本存放于-20℃或-80℃，但应避免反复冻融。

2. 血浆：使用EDTA或肝素作为抗凝剂，采集标本后30分钟内，以2 - 8℃进行1000g离心20分钟，或将标本存放于-20℃或-80℃，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：先用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液。然后，称重并剪碎组织，将剪碎的组织与对应体积的PBS混合（一般按1:9的重量体积比，例如1g的组织样品对应9mL的PBS）。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂。将混合物放入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以进行超声破碎或反复冻融。最后，以5000×g离心5~10分钟，取上清进行检测。

4. 细胞培养物上清或其他生物标本：以1000g离心20分钟，取上清进行检测，或将标本存放于-20℃或-80℃，但应避免反复冻融。

注：溶血标本不适合进行此项检测，因为溶血会影响后续的检测结果。

主要参考文献

[1] 乔佳明 张芝晴 张振勇 李少伟 夏宁邵 顾颖；人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定。《中国免疫学杂志》2018年 第8期。