胞浆蛋白提取试剂盒是一种用于提取哺乳动物组织和细胞中胞质蛋白的试剂盒。该试剂盒中的裂解液含有温和的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,可用于获得蛋白,并可应用于免疫印迹实验等基础研究实验。然而,由于含有酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶。
在1ml的冷裂解液中加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF,混匀后放置在冰上备用。取0.1g新鲜组织放入玻璃匀浆器中,用眼科剪将组织块剪碎,然后加入0.5-1ml新配置的裂解液,冰上操作下研磨至无明显组织块。将组织匀浆液转移到1.5ml的EP管中,以4°C 12000g离心30min,吸取上清液进行蛋白定量或变性蛋白实验。
裂解液的用量:107个细胞需要1ml裂解液。
贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次细胞,加入计算好的细胞裂解液,用细胞刮刀刮离细胞,将刮离的细胞裂解液转移到EP管中,在冰上颠倒裂解20-30min。
悬浮细胞:用冷的PBS洗两次细胞,以4°C 400g离心收集细胞,加入裂解液涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次。裂解完毕后,以4°C 12000g离心30min,将上清液移入新的EP管中,进行蛋白定量或变性蛋白实验。
为了建立经济、稳定、简便、可重复性强的系统性红斑狼疮兔模型,以便于今后进一步研究SLE的发病机制和治疗学。选取1岁龄体重约2.5kg的雌性新西兰白兔50只,随机分为5组,每组10只。提取同种异体肝脏细胞核蛋白及细胞浆蛋白,设首次注射时间为第0天,于第0天及第1、2、4、6、8、10、12周末予实验组兔蛋白提取物500μg/次(浓度为:1 mg/ml),其中,实验组1皮下注射肝细胞核蛋白,实验组2皮下注射肝细胞浆蛋白,实验组3经静脉注射肝细胞浆蛋白;相同时间点予对照组1皮下注射等体积PBS,予对照组2静脉注射等体积PBS。
实验组1、2及对照组1首次注射时将抗原制剂与完全弗氏佐剂等体积乳化。从第1周开始至第18周末,每两周采集各组兔血液,并以特制兔体液收集代谢笼收集各组兔24小时尿液。观测各组兔血液中的生化指标和24小时尿液中的蛋白含量;使用ELISA法测定各组兔血清中的ANA、抗dsDNA抗体和抗Sm抗体。在第18周末处死所有实验动物。
对皮肤组织进行HE和免疫组化染色;对肾脏组织进行HE染色、Masson染色和免疫组化染色,并对肾脏和皮肤病变的严重程度和范围进行半定量分级。
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