成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见的细胞类型,其形态结构和功能与其活动状态密切相关。在功能活动旺盛时,成纤维细胞呈扁平星形,胞核呈卵圆形,胞质内含有丰富的粗面内质网、核蛋白体、高尔基复合体以及微丝和微管等结构。这些结构的存在表明成纤维细胞具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白的能力,从而形成胶原纤维、弹性纤维、网状纤维和基质。而在相对静止或功能活动不活跃时,成纤维细胞转化为纤维细胞,其形态较小且呈梭形,胞质较少,细胞器发育不完全。然而,在创伤修复和结缔组织再生等条件下,纤维细胞可以重新转化为功能活跃的成纤维细胞,参与蛋白质的合成和分泌,形成纤维和基质。
为了培养成纤维细胞,首先需要将皮肤组织剪成细小碎块,然后使用0.25%胰蛋白酶进行消化。消化后的组织碎块加入含有10%FBS和1万U/L青霉素、链霉素的RPMR1640完全培养基中,并放入含有5%二氧化碳、37℃的孵箱中培养。每隔12小时更换培养液,直到细胞长成梭形并融合至约70%时,使用胰蛋白酶进行细胞传代。
为了鉴定成纤维细胞的纯度,可以使用鼠抗人成纤维细胞抗体进行染色。首先,将固定的细胞与鼠抗人成纤维细胞抗体孵育,然后用PBS洗涤细胞,并加入抗鼠二抗进行孵育。最后,在荧光显微镜下观察细胞,并计算荧光阳性细胞数和明场总细胞数的比值,作为纯度指标。
[1] 运动解剖学、运动医学大辞典
[2] 蛋白酶活化受体在胎儿真皮成纤维细胞上的表达