精子细胞BWW培养基的应用研究？ ¹

精子细胞BWW培养基是一种常用的营养液，用于处理广谱动物和人体精子细胞。它由系列盐离子、酚红、葡萄糖、丙酮酸钠、BSA等以及抗生素组成。该培养基的配方基于Biggers-Whitten-Whittingham（BWW）研究小组在1971年的成果，并经过无菌处理。

如何使用精子细胞BWW培养基

以下是使用精子细胞BWW培养基的操作步骤：

1、将精液样本室温放置，使其液化。

2、制备精子细胞，可以使用上泳法或非连续密度梯度法。

3、将含有精子细胞的离心管置于37℃的细胞培养箱中孵育。

4、离心精子悬液，使精子细胞密度接近于10×106/ml，将其重悬于精子细胞BWW培养基中，并在37℃的细胞培养箱中孵育。

精子细胞BWW培养基的应用研究

精子细胞BWW培养基对小鼠生精细胞印迹基因H19和IGF2r甲基化状态的影响

通过改进培养条件，研究人员成功建立了一个稳定、高效的小鼠生精细胞体外培养方法。他们发现，在精子细胞BWW培养基中培养的生精细胞能够获得更多的单倍体圆形和长形精子细胞。

研究方法包括使用两步酶消化法和差速贴壁法分离生精细胞，以曲细精管来源细胞为饲养层，在添加睾酮、卵泡刺激素、低浓度胶质细胞神经营养因子和表皮生长因子的培养基中培养生精细胞。通过RT-PCR检测精母细胞特异性基因P19和单倍体精子细胞特异性基因TP1 mRNA的表达，研究人员评估了生精细胞的增殖和分化情况。同时，他们使用激光共聚焦显微镜进行分选细胞纯度检测。

研究结果表明，在添加睾酮、卵泡刺激素、低浓度胶质细胞神经营养因子和表皮生长因子的培养基中培养第7天，可以观察到较多的生精细胞克隆并检测到P19 mRNA的表达。在培养第12天，可以观察到较多的圆形精子细胞和个别活动精子以及TP1 mRNA的表达。经过激光共聚焦显微镜鉴定，分选的单倍体圆形精子细胞纯度达到82%。

结论：该研究成功建立了一个高效、稳定的小鼠生精细胞体外培养体系，并证明激光共聚焦显微镜可用于初步鉴定单倍体精子细胞。

参考文献

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