作为萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase )的作用底物，D-荧光素常被应用于哪些实验领域呢？
1）体内活体成像In vivo imaging：通过将荧光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞或传染疾病注射到研究动物模型中，可以实时、非侵入性地监测疾病进程和/或药效。
2）体外研究In vitro study：包括荧光素酶和ATP水平分析、报告基因分析、高通量测序和各种污染检测。
荧光素酶和ATP的作用下，D-荧光素（底物）被氧化发光。荧光素酶浓度越高，产生的光量子数就越多。
在体内，荧光素酶（Luc）催化底物D-荧光素，利用ATP和Mg2+作为辅因子，在氧气存在下发射黄绿光，然后在37°C下转移到红光。
在体外，温度、pH或底物浓度等因素可能影响反应灵敏性。建议使用pH 7.8的缓冲液，并将所有试剂预热到室温。在反应缓冲液中添加过量的ATP和Mg2+可以达到最佳反应状态。
D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，在整个生物技术领域广泛应用，尤其是体内活体成像技术。
通过转染携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒到细胞中，然后将细胞注入研究动物体内，再注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度的变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗效果等。此外，也可以利用ATP对反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。
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