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质粒双酶切?
生物医学工程
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质粒双酶切?
我在将质粒进行双酶切时,因为两个酶切位点之间的距离只有几十bp,理论上有两条带,但是那个几十bp根本看不见,另外未被酶切的环形质粒与酶切了的线性质粒大小相差几十bp,几乎无差别,电泳时几乎在同一位置,所以根本无法将酶切后的线性质粒和原来未酶切的环形质粒相分开。这可怎么办呀?不能改变酶切位点,因为酶切位点是在多克隆位点选的,多克隆位点才能进行基因克隆。
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共2个回答
抛去江山如画,高级研发工程师
2022-05-04回答
几十bp在胶上本身就是看不清的。你把模板量设置的小一点,模板DNA不是越多越好,还有就是最好分开切,切一次回收一次,一共回收两次。最后转化的时候再做个阴性对照。
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冰言儿〆,设备维修
2022-05-04回答
多切一会儿理论上就可以全部切开了,实在不行酶连之后做菌P验证不就好啦
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