LC色谱的峰分不开咋办，出现肩峰？

前面的时候可以分开。用异丙醇冲洗柱子1.0ml/min，冲洗了半个小时后，测样品的2.5和2.8的两个峰叠加在一起了？甲醇冲洗三个小时也还是这样，降低流速至0.5后，分的稍微好了，但是基本没有变化。是因为异丙醇没有冲洗干净的原因，还是柱子堵了塌陷了（异丙醇冲洗的时候短时间压力达到了500bar，泵自己报停，是否有影响）。


现在的样



以前的样