western怎么选择上样量?

这几次做出来每次都是上样10微升时候内参很粗，连在一起，但是我要测的目的蛋白好像丰度不高，很浅的条带，需要背景很高才能看出来，上样15微升，目的蛋白条带好多了，但是内参更粗了...求问该如何选择？蛋白浓度不到10微克每微升。