如果阴性对照没有染色而阳性对照标本阳性弱，应该考虑：
① 标本的固定方式，不当的固定方式或固定时温度过高，都会影响到所检测的抗原的数量和质量。
② 不当的烤片温度及时间，过高的烤片温度会影响抗原的保存，同样过长的烤片时间也对抗原表达有影响
③ 不适当的抗原修复方式，由于石蜡切片在制作的过程中固定剂对抗原的封闭作用，必须做抗原热修使抗原重新暴露，至于使用哪一种方法，请参照厂家说明，同时结合标本的具体情况而定。固定时间较长的标本，也需要相应的加强修复强度。
④ 抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间是否正确。一抗可参照稀释范围，进行梯度测试，找出最佳的使用浓度。
⑤ 切片上遗留了过多的缓冲液，二次稀释了抗体。 ⑥ 孵育时切片是否放置水平，否则会导致抗体流失。
如果阴性对照没有反应，阳性对照反应良好，而标本弱阳性，则可能是由于阳性对照不是同一种组织、或固定方式不同等原因所致。
