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细胞裂解液对实验的影响及红细胞裂解液的配方? 1

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细胞裂解液在细胞上游操作中起着重要作用。RIPA是最常用的裂解液,用于提取细胞和组织中的可溶性蛋白。然而,近年来有报道称裂解液对实验有影响,例如RIPA裂解液对IFN抗原抗体间的结合有强烈影响,不适用于ELISA检测IFN时的细胞和组织样本的裂解。

红细胞裂解液在动物试验中被广泛使用,与PBS、生理盐水和细胞培养基并称为实验室四大液体耗材。然而,红细胞裂解液如何实现裂解红细胞而不破坏其他有核细胞的效果呢?

红细胞裂解液的配方

常用自配红细胞裂解液的主要成分包括碳酸氢钾、氯化铵和EDTA.2Na。配方中的碳酸氢钾(1g)、氯化铵(8.3g)和EDTA.2Na(0.037g)经过KOH和HCl的调节,使pH值达到7.2-7.4(此配方为配制1000ml红裂液)。然后将其低温储存备用。

由于EDTA.2Na用量很小,称取0.037g会造成较大的误差。因此,我通常会准备一瓶EDTA.2Na的储存液(0.37gEDTA.2Na溶于1000ml ddH2O中),每次配制1000ml红裂液时从中吸取100ml储存液。

红细胞裂解液各个成分在裂解过程中的作用

红细胞裂解液中,氯化铵是主要的效应物质。铵根离子无法透过细胞膜,而其他离子可以通过,导致细胞内外离子浓度差异,形成渗透压差。外部的水分会扩散至胞内,使细胞膨胀。由于红细胞结构相对简单,膨胀的耐受能力较差,大部分红细胞会被涨破。碳酸盐的主要作用是缓冲pH值。EDTA与镁离子和钙离子形成的螯合物主要破坏细胞膜稳态,对白细胞影响较小,因此这种裂解液在裂解红细胞的同时对白细胞的影响较小。

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