大肠杆菌JM110菌株是一种具有硫酸链霉素抗性的感受态细胞,经Ca离子处理后可摄取外源DNA。该菌株缺失了甲基化基因dam和dcm,使得提取得到的质粒DNA对dam和dcm甲基化敏感。此外,JM110菌株还具有lacIqlacZΔM15基因,可以进行蓝白斑筛选。然而,由于转化效率不高,一般不适用于质粒构建,而只适用于质粒转化。经特殊工艺制作的JM110感受态细胞的pUC19质粒转化效率约为107cfu/μg DNA。
1. 从-80℃取出JM110感受态细胞,迅速放入冰中。等待菌块融化后,加入目的DNA(质粒或连接产物),轻轻混匀。注意避免使用枪吸打。
2. 将细胞置于42℃水浴中热激45秒,然后迅速放回冰中静置2分钟。晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(如2YT或LB),混匀后在37℃、200 rpm的条件下复苏60分钟。
4. 以5000 rpm离心一分钟,收集菌块后留取约100 μl上清,轻轻吹打重悬菌块,并涂布到含有相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱中过夜培养。
1. 最好在冰中缓慢融化感受态细胞,并在8分钟内加入目标DNA。不要在冰中放置时间过长,否则会降低转化效率。
2. 在混入质粒时应轻柔操作,避免过度搅拌。
3. 转化高浓度的质粒时,可以相应减少最终用于涂板的菌量。
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[1] JM110感受态细胞说明书