胎牛血清是妊娠后期剖腹取出的胎牛血清。它的营养成分完全而丰富,代谢产物很少,微生物感染的可能性最小,品质最高。特级胎牛血清是经过胚胎干细胞测试的专用级血清,具有极低的BSE和病毒感染风险。这类产品符合USP/EP标准,并通过多项质量测试。大多数产品经过三级0.1μm过滤制造。特级胎牛血清主要用于培养胚胎干细胞、间充质干细胞等干细胞。
1、在特级胎牛血清冷冻管上标记好日期、研究者姓名、细胞数、细胞传代数和细胞类型(以及任何其他有用信息,比如遗传修饰)。
2、如果细胞贴壁,则去除细胞培养基,用PBS洗涤,加入足量胰蛋白酶覆盖细胞并在37°C培养箱中孵育约2分钟。在细胞培养基中重悬细胞并移入50mLFalcon管中。
3、如果细胞为悬浮状态,只需将所需体积细胞直接移入50mLFalcon管中。
4、用血细胞计数器进行细胞计数以确定其活力。用于冷冻保存的细胞活力至少应为75%。
5、在室温下以1,000rpm离心5分钟。
6、准备冷冻培养基。
7、去除上清液,轻轻散开沉淀物。
8、添加冷冻培养基至所需的细胞密度。对于哺乳动物细胞,所需细胞密度通常为10^6/mL冷冻培养基。在室温下,细胞不应在冷冻培养基中超过10分钟。
9、在各冷冻管中各分装1mL,并盖紧盖子。
10、室温下将冷冻管移至CoolCell快速冷冻机中,然后放入-80°C冰箱中。CoolCell快速冷冻机将确保温度以1°C/分钟稳步下降。
11、大约24小时后,从CoolCell快速冷冻机中取出冷冻管并转移到液氮中长期储存。
[1] 农业大词典
[2] 特级胎牛血清使用说明